1.2 微生物的培养技术及应用（第2课时）课件-2023-2024学年高二下学期生物人教版选择性必修3

酵母菌的纯培养 探究·实践 实验原理 ①分散的微生物在适宜的固体培养基表面或内部可以繁殖形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞群体，这就是菌落。②采用平板划线法和稀释涂布平板法能将单个微生物分散在固体培养基上，之后经培养得到的单菌落一般是由单个微生物繁殖形成的纯培养物。 ②稀释涂布平板法: ①平板划线法: 获得单菌落的方法 微生物群 分散或稀释 单个细胞 单个菌落 繁殖 样品 平板划线法：通过接种环在固体培养基（平板）表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面。经数次划线后培养，可以分离得到由单个微生物繁殖而形成的单菌落。 1 酵母菌的纯培养 探究·实践 ①学会配制培养酵母菌的培养基并倒平板。②学会进行无菌操作。③尝试通过平板划线操作来获得纯化的酵母菌菌落。 目的要求 材料用具 酵母菌培养液、马铃薯、葡萄糖（或蔗糖）、琼脂、蒸馏水、天平、小刀、纱布、烧杯、锥形瓶、棉塞、牛皮纸（或报纸）、皮筋、培养皿、接种环、酒精灯、超净工作台、高压蒸汽灭菌锅、干热灭菌箱和恒温培养箱等。 2 实验步骤 ①配制培养基 ②灭菌 称去皮马铃薯200g切成小块 加水1000ml，煮沸至软烂 纱布过滤 用蒸馏水定容至1000ml 加入20g葡萄糖15-20g琼脂 获取滤液 1．制备培养基 5-8套培养皿，用几层牛皮纸包紧，放入干热灭菌箱内，160-170℃灭菌2h。 配制好的培养基转移到锥形瓶加棉塞，包上牛皮纸，用皮筋勒紧，放入高压蒸汽灭菌锅中，在压力为100kPa、温度为121℃的条件下，灭菌15-30min。 配制培养基：称取去皮的马铃薯200 g，切成小块，加水1 000 mL，加热煮沸至马铃薯软烂，用纱布过滤。向滤液中加入20 g葡萄糖（也可用蔗糖代替）、15〜20 g琼脂，用蒸馏水定容至1 000 mL。 灭菌：将配制好的培养基转移到锥形瓶中，加棉塞，包上牛皮纸，并用皮筋勒紧，再放入高压蒸汽灭菌锅中，在压力为100 kPa、温度为121 ℃的条件下，灭菌15〜30 min。将5〜8套培养皿包成一包，用几层牛皮纸包紧，放入干热灭菌箱内，在160〜170 ℃灭菌2 h。 3 ①拔出锥形瓶的棉塞 ②将瓶口迅速通过火焰 ③用拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，将培养基（10 ~ 20mL）倒入培养皿，立即盖上皿盖 ④等待培养基冷却凝固后，将培养皿倒转过来放置 待培养基冷却至50℃左右时，在酒精灯火焰附近倒平板 ④ ③ ① ② 防止瓶口微生物污染 防止冷凝水滴落在培养基上引发污染。 实验步骤 ③倒平板 1．制备培养基 4 思考1：需冷却到50℃左右时，才能倒平板，为什么？用什么办法来判断温度？ 温度过高，烫手。温度过低，琼脂会凝固； 用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉温度下降到刚刚不烫手即可。 思考2：平板冷凝后，为什么要将平板倒置？ 将平板倒置，既可以避免培养基中的水分过快蒸发又可防止皿盖上的冷凝水落入培养基，造成污染。 思考3：培养基的制作是否合格？ 如果未接种的培养基在恒温箱中保温1～2 d后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。 ③倒平板注意问题 实验步骤 2．接种和分离酵母菌 接种环 （ 划线接种用 ） ①灼烧接种环，直至接种环金属丝烧红 ②在火焰旁冷却接种环，拔出酵母菌培养液试管的棉塞 ③试管口通过火焰 ④在火焰附近用接种环蘸取一环菌液 ⑤试管口通过火焰，并塞上棉塞 ⑥将皿盖打开一条缝隙，用接种环在培养基表面迅速划三至五条平行线，盖上皿盖 ⑦灼烧接种环，待其冷却后，从第一次划线末端开始作第二次划线。重复以上操作，作第三、四、五次划线 ▲注意：①接种环只蘸一次菌液，但要在培养基不同位置连续划线多次；②划线首尾不能相接；③每次划线前接种环进行灭菌； ④划线后，培养皿倒置培养。 通过接种环在固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。经数次划线后培养，可以分离得到单菌落。平板划线的具体操作如图的流程图。 平板划线法注意事项 第1区划线 接种环灭菌 第2区划线 接种环灭菌 第3区划线 接种环灭菌 接种环灭菌 ①接种环只蘸一次菌液，在培养基不同位置连续划线多次； ②划线首尾不能相接； ③每次划线前接种环进行灼烧灭菌，待冷却后再开始画线； ④划线后，培养皿倒置培养。 思考1：为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？ 灼烧时期 目的 取菌种前 每次划线前 接种结束后 杀死接种环上原有微生物 杀死上次划线时残留菌种，使下一次划线菌种直接来源上次划线的末端 杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者 思考2：在灼烧接种环之后，要等其冷却后再进行划线的原因？在作第二次以及其后的划线操作时，