1.2.2微生物的选择培养和计数课件-2023-2024学年高二下学期生物人教版（2019）选择性必修3

PCR是一种在体外DNA复制的技术，此项技术要求使用耐高温的DNA聚合酶。 1973年，科学家在美国黄石国家公园的热泉中筛选出耐热的水生栖热菌，并从这种菌种提取出耐高温的DNA聚合酶。 科学实例： 水生栖热菌能在70-80℃高温条件下生存，而绝大多数微生物在此条件下不能生存。 耐高温的酶 耐高温生物体 耐高温环境（热泉、火山口） 寻找 寻找 寻找目的菌种时要根据它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。 (1)筛选思路： (2)启示： 1 2 启示：根据微生物对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。 耐寒微生物 耐热微生物 石油分解菌 同理： 人为提供有利于目的菌生长的条件（包括营养、温度和PH）等，同时抑制或阻止其他微生物生长。 选择培养基 适用实验室微生物的筛选 第一章 发酵工程 第2节 微生物的选择培养和计数 杆菌 球菌 霍乱弧菌 葡萄球菌 一、选择培养基 1.概念: 2.类型: 在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基称为选择培养基。 类型 条件 分离得到的菌种 改变培养条件 70～80℃的高温 添加某种化学物质 加入青霉素 高浓度食盐 特殊碳、氮源 石油是唯一碳源 营养缺陷 不加碳源 不加氮源 水生栖热菌 酵母菌、霉菌等真菌 金黄色葡萄球菌 能消除石油污染的微生物 自养型微生物 固氮菌 1g土壤中有多少能分解尿素的细菌？ 分离：获得分解尿素的细菌的纯培养物 计数：测定分解尿素的细菌的数量 用平板划线法接种培养结果的图片如下。请结合图片分析，平板划线法能否达到对细菌进行计数的目的？为什么？ 　不能，平板划线法最开始的划线很可能菌类会长成一片，导致无法计数，此外灼烧接种环的时候也会杀死一部分菌类。 二、微生物的选择培养 1g土壤中有多少能分解尿素的细菌？ 分离：获得分解尿素的细菌的纯培养物 计数：测定分解尿素的细菌的数量 稀释涂布平板法——将菌液进行一系列梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到固体培养基的表面，进行培养。 原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个单菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。 稀释涂布平板法 系列梯度稀释 涂布平板 将10g土样加入盛有90mL无菌水的锥形瓶中，充分摇匀。取1mL上清液加入盛有9mL无菌水的试管中，依次等比稀释。 1×10 1 mL 1 mL 1 mL 1 mL 1 mL 1 mL 1×102 1×103 1×104 1×105 1×106 1×107 9 mL 无菌水 90mL无菌水 10g ①铲取土样，将样品装入纸袋中 注意：取土样用的小铁铲和盛土样的的纸袋在使用前都要灭菌 注意：移液管要经过灭菌，并且操作应在酒精灯火焰附近完成 1.样品的稀释： 2.涂布平板操作： ①取0.1mL 菌液滴加到培养基表面 ②将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中 ③将涂布器放在火焰上灼烧，待酒精燃尽、涂布器冷却后，再进行涂布 ④用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。涂布时可转动培养皿，使涂布均匀 稀释涂布平板法 稀释涂布平板法操作的注意事项： ⑴各操作细节要保证“无菌”，所有操作都应在酒精灯火焰旁进行。 ⑵将涂布器浸在盛有体积分数为70%的酒精的烧杯中。取出时，要让多余的酒精在烧杯中滴尽，然后将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃。 （3）不要将过热的涂布器放在盛有酒精的烧杯中，以免引燃其中的酒精。 样品的稀释 涂布平板 微生物的培养与观察 土壤取样 取0.1mL菌液，滴加到培养基表面。 将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中 将涂布器放在火焰上灼烧，待酒精燃尽，涂布器冷却后，再进行涂布。 用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。涂布时可转动培养皿，使涂布均匀。 每个稀释度下应涂布几个平板？为什么？ 3.培养并观察培养基菌落： 待涂布的菌液被 后，将平板 ，放入30-37℃ 中培养 d，在涂布有 菌液的平板上就可以观察到分离的 。 培养基吸收 倒置 恒温培养箱 1~2 合适浓度 单菌落 恒温培养箱 细菌一般选用104、105、106 稀释倍数的菌液进行涂布培养 1×10 1 mL 1 mL 1 mL 1 mL 1 mL 1 mL 1×102 1×103 1×104 1×105 1×106 1×107 9 mL 无菌水 90mL无菌水 10g 计算公式： M代表稀释倍数 C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数 V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL) 1克样品中的菌落数＝(C÷V)×M 平板划线法