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大题分析与表达练7 基因工程类大题突破
1.新型冠状病毒主要通过其表面刺突蛋白(S蛋白)与人体细胞膜上的ACE2蛋白结合实现感染。截至2021年4月12日,中国成为全球首个能提供三种生产新型冠状病毒疫苗技术路线(灭活疫苗、重组蛋白疫苗和腺病毒载体疫苗)的国家。三种新型冠状病毒疫苗研发途径的技术原理如下:灭活疫苗是用各种理化方法灭活病原微生物及其代谢物,再通过纯化等步骤制备出相应疫苗;重组蛋白疫苗是将病毒的目标抗原基因整合到表达载体中,然后将表达载体转化到中国仓鼠卵巢细胞中,经诱导表达出大量的抗原蛋白,再通过纯化而得到的疫苗;腺病毒载体疫苗是以腺病毒作为载体,将目标抗原基因重组到载体病毒基因组中得到的疫苗。回答下列问题。
(1)上述灭活疫苗中的“灭活”是使新型冠状病毒失去 ,但并不破坏该病毒的 。
(2)制备重组蛋白疫苗和腺病毒载体疫苗均需要获取S蛋白基因,获取过程是提取新型冠状病毒总RNA,在 酶的作用下合成DNA,再采用PCR技术选择性扩增出S蛋白基因。PCR技术的前提是要有一段 ,以便根据这一序列设计出特异性的引物。
(3)腺病毒载体疫苗是将S蛋白基因重组到改造后的腺病毒内,导入人体,在体内产生S蛋白,刺激人体产生相应抗体。改造后的腺病毒载体应具备的条件是 (答出两点即可)。与重组蛋白疫苗相比,腺病毒载体疫苗的优点体现在 。
(4)腺病毒载体疫苗注入人体后,其发挥作用的机理是
。2.基因工程抗体又称重组抗体,是指利用重组DNA及蛋白质工程技术对编码抗体的基因按不同需要进行加工改造和重新装配,经转染适当的受体细胞所表达的抗体分子。下图为某研究所制备小鼠抗甲型肝炎病毒抗体的流程图。回答下列问题。
(1)实验室构建重组质粒时,为保证目的基因与载体的正确连接,过程①最好选择的限制酶是 。
(2)在重组质粒中,目的基因首端的启动子能够 ,从而驱动目的基因的转录。除启动子之外,重组质粒还应该包含 等。
(3)为了筛选出导入目的基因的骨髓瘤细胞,可以在过程③的培养液中添加 ,过程③所获得的细胞具有 的特点。
(4)临床试验发现,过程⑤提取的小鼠抗甲型肝炎病毒抗体具有外源性,容易被人体的免疫系统清除,从而导致其治疗效果大大降低。下页左上图抗体中的A区是与抗原特异性结合的区域,B区是引起人体免疫反应的区域。若要避免小鼠抗甲型肝炎病毒抗体被人体免疫系统清除,请提出合理的改造思路。
3.某研究小组从土壤中分离获得能分解纤维素的细菌(A 菌),从 A 菌中提取出一种纤维素酶基因(CBHⅡ,长度为1.4 kbp)并进行 PCR扩增,然后与高效表达载体 pUT质粒(长度约为 11.7 kbp)连接构建成重组质粒并导入 A 菌,从而获得分解纤维素能力更强的工程菌(B菌)。回答下列问题。
(1)采集土样时,可以选择树林中多年落叶形成的腐殖土,原因是 。采集到的样品加无菌水稀释后 (填“需要”或“不需要”)进行灭菌处理。
(2)CBHⅡ基因两端需添加相关酶切位点才能与图1 所示的pUT质粒连接,因此扩增CBHⅡ基因时需在两种引物上分别添加 序列和 序列。
限制酶
识别序列及酶切位点
BglⅡ
A↓GATCT
BstE Ⅱ
G↓GTAACC
SacⅠ
G↓AGCTC
MspⅠ
C↓CGG
BamH Ⅰ
G↓GATCC
图1
(3)为了鉴定重组质粒是否构建成功,将重组质粒导入A菌,并将其接种在含 的培养基中培养,然后提取3个不同菌落的质粒分别进行双酶切验证,将酶切片段和CBHⅡ基因分别进行电泳,结果如图2所示。据此分析,菌落 中成功导入了重组质粒。
图2
(4)为检测B菌的纤维素分解能力,将含有质量分数为20%的纤维素的培养基分为3组,一组接种B菌,一组不作处理,一组接种 ,在相同条件下培养一段时间,测定培养基中纤维素含量,结果如图3所示,说明