内容正文:
第1节 重组DNA技术的基本工具
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课前•基础认知
素养•目标定位
目 标 素 养
1.概述基因工程的概念,关注基因工程的诞生和发展历程,认同基因工程的诞生和发展离不开理论研究和技术创新。
2.运用结构与功能观,说明重组DNA技术所需的三种基本工具的作用及特点,概述基因工程中载体需要具备的条件,培养科学思维能力。
3.通过“DNA的粗提取与鉴定”活动, 发展科学探究素养和自主学习、设计方案等能力。
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知 识 概 览
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一、基因工程的概念
1.操作场所:生物体外。
2.操作技术:转基因等技术。
3.操作结果:赋予生物新的遗传特性,创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。
4.操作水平:DNA分子水平。因此基因工程又叫作重组DNA技术。
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微思考1为什么不同生物的DNA可以进行体外重组?
提示:不同生物中DNA分子的基本组成单位相同,都是4种脱氧核苷酸;空间结构相同,都是规则的双螺旋结构;生物界共用一套遗传密码,相同的遗传信息在不同生物体内表达出相同的蛋白质。
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微判断1
1.基因工程育种的优点是可以集中亲本的优良性状。( )
2.通过基因工程改造成的生物为新物种。( )
3.基因工程育种与杂交育种相比的优点是打破了生殖隔离。
( )
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二、重组DNA技术的基本工具
1.限制性内切核酸酶——“分子手术刀”。
(1)来源:主要是从原核生物中分离纯化出来的。
(2)作用特点:具有专一性。
①识别双链DNA分子的特定核苷酸序列。
②使每一条链中特定部位的磷酸二酯键断开。
(3)识别序列的特点:大多数限制酶的识别序列由6个核苷酸组成,少数由4个、8个或其他数量的核苷酸组成。
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(4)结果:产生DNA片段末端(通常有黏性末端和平末端两种形式)。
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2.DNA连接酶——“分子缝合针” 。
(1)作用:将切下来的双链DNA片段“缝合”起来,恢复被限制酶切开的磷酸二酯键。
(2)结果:拼接成新的DNA分子。
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(3)种类。
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3.基因进入受体细胞的载体——“分子运输车”。
(1)作用:将外源基因送入受体细胞。
(2)常用载体——质粒。
①本质:一种裸露的、结构简单、独立于真核细胞细胞核或原核细胞拟核DNA之外,并具有自我复制能力的环状双链DNA分子。
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②作为载体的条件:a.有一个至多个限制酶切割位点,供外源DNA片段(基因)插入其中;b.进入受体细胞后,能在细胞中进行自我复制,或整合到受体DNA上,随受体DNA同步复制;c.常有特殊的标记基因,便于重组DNA分子的筛选。
(3)其他载体:噬菌体、动植物病毒等。
微点拨 相同的黏性末端不一定来自同一种限制酶的切割,可能来自不同限制酶的切割。
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微思考2
DNA连接酶和DNA聚合酶的作用部位相同吗?
提示:相同。两种酶的作用部位都是磷酸二酯键,只是DNA连接酶是在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键,而DNA聚合酶只能将单个脱氧核苷酸连接到已有的DNA片段上,且需要以一条DNA链为模板。
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微判断2
1.重组DNA技术所需要的工具酶有限制酶、DNA连接酶和载体。( )
2.不同限制酶切割后一定形成不同的黏性末端。( )
3.用作载体的质粒DNA分子上至少含有一个限制酶切割位点。( )
4.T4 DNA连接酶既能连接黏性末端,又能连接平末端。
( )
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三、DNA的粗提取与鉴定
1.提取原理:
(1)DNA 不溶于 酒精,但某些蛋白质 溶于 酒精。
(2)DNA在不同浓度的 NaCl 溶液中溶解度不同,它能溶于物质的量浓度为 2 mol/L的NaCl溶液。
2.鉴