内容正文:
第二章 2.2.1 动物细胞培养
动物细胞工程常用的技术包括 、 和 等,其中
是动物细胞工程的基础。
一、动物细胞培养
1. 概念:动物细胞培养是指从动物体中取出相关的组织,将它分散成 ,然后在适宜的培养条件下,让这些细胞 和 的技术。
2. 动物细胞培养的条件
(1)营养 (合成培养基 + 血清等天然成分)
①已知成分:将细胞所需的 按其 和所需量严格配制而成的培养基,称为 。
②未知成分:使用合成培养基时,通常需加入 等一些天然成分。
③培养基的物理性质:培养动物细胞一般使用 ,也称为培养液。
(2)无菌、无毒的环境
①对培养液和所有培养用具进行 处理以及在 环境下进行操作。
②培养液需要定期更换 ,以便清除 ,防止细菌代谢物积累对细胞自身造成伤害。
(3)温度、pH和渗透压
①温度:哺乳动物细胞培养多以 ℃为宜。 ②pH:多数动物细胞生存的适宜pH为 。
③适宜的渗透压:维持细胞正常的
(4)气体环境
①O2:是细胞新陈代谢 的,CO2:主要作用是 。
②在进行细胞培养时,通常采用培养皿或松盖培养瓶,并将他们置于含有 空气和 CO2的混合气体的CO2培养箱中进行培养。
二、动物细胞培养的过程
取动物组织 → 分散成 → 制成 → 进行 → 分瓶、进行
1.取动物组织
一般取材于 或 动物的组织、器官。因为这些分化程度低、分裂能力强容易培养。
2.制成细胞悬液
(1)方法:用 或 、胶原蛋白酶等处理一段时间,将细胞分散成单个细胞。
(2)用培养液将细胞制成 。
3.进行原代培养
(1)原代培养:指动物组织经处理后的 。(分瓶之前的培养)
(2)体外培养动物细胞可以分为两大类:①悬浮生长类;细胞能够 在培养液中生长增殖。②贴壁生长类:需要 于某些基质表面才能生长增殖,大多数细胞属于这种类型。
(3)细胞贴壁:将细胞悬液放入培养瓶内,置于适宜环境中培养,悬液中分散的细胞很快就 生长的现象称为细胞贴壁。
(4)接触抑制:当贴壁细胞分裂生长到表面 时,细胞停止 的现象称为细胞的接触抑制。
4.分瓶、进行传代培养
(1) 悬浮培养的细胞会因 过大、 积累和培养液中营养物质等因素而分裂受阻,贴壁细胞在生长增殖时,除受上述因素影响外,还会发生 现象。这时就需要对细胞进行分瓶培养,让细胞继续增殖。
(2)传代培养:指 的细胞培养。
(3)在进行传代培养时,悬浮培养的细胞直接用 收集;贴壁细胞需要重新用 等处理,使之分散成单个细胞,然后再用 法收集。
三、干细胞培养及其应用
1.概念:动物和人体内仍保留的少数具有 和 能力的细胞。
2.分布:存在于 、 和脐带血等多种组织和器官中。
3.分类:包括 和 等。
(1)胚胎干细胞(简称 细胞),也叫全能干细胞
①分布:存在于 中。
②特点:具有分化为成年动物体内的 一种类型的细胞,并进一步形成机体的所有组织和器官甚至
的潜能。
③应用实例:ES细胞在体外分化成心肌细胞、神经元细胞和造血干细胞等。
(2)成体干细胞
①分布:存在于成体组织或器官内中。
②举例:骨髓中的 、神经系统中的 、睾丸中的精原干细