内容正文:
第1节 动物细胞工程
一、必备知识
知识点1
动物细胞培养
1.概念:从动物体中取出相关的组织,将它分散成单个细胞,然后在适宜的培养条件下,让这些细胞生长和增殖的技术。
2.基本条件
(1)营养条件:糖类、氨基酸、无机盐、维生素等,此外,在使用合成培养基时,通常需要加入血清等一些天然成分。
(2)无菌、无毒的环境
①对培养液和所有培养用具进行灭菌处理。②在无菌环境下进行操作。
③定期更换培养液,以便清除代谢物,防止细胞代谢物积累对细胞自身造成危害。
第1节 动物细胞工程
一、必备知识
知识点1
动物细胞培养
1.概念:从动物体中取出相关的组织,将它分散成单个细胞,然后在适宜的培养条件下,让这些细胞生长和增殖的技术。
2.基本条件
(3)适宜的温度、pH和渗透压。
(4)适宜的气体环境:95%空气+5%CO2。
①O2:细胞代谢所必需的。
②CO2:维持培养液的pH。
第1节 动物细胞工程
一、必备知识
知识点1
动物细胞培养
3.培养过程
(1)细胞贴壁:细胞贴附在培养瓶瓶壁上生长增殖的现象。
(2)接触抑制:当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时,
细胞通常停止分裂增殖的现象。
(3)胰蛋白酶、胶原蛋白酶处理
①第一次使用的目的:使组织细胞分散开。
②贴壁细胞传代培养时使用的目的:
使细胞从瓶壁上脱离下来,分散成单个细胞,便于分瓶后继续培养。
第1节 动物细胞工程
一、必备知识
知识点1
动物细胞培养
3.培养过程 (4)处理使细胞分散开的目的
①使细胞与营养充分接触,保证细胞所需要的营养供应。
②保证细胞内有害代谢物的及时排出。
特别提醒 ①使用胰蛋白酶时,要控制好作用时间,
因为胰蛋白酶不仅能分解细胞间的蛋白质,长时间作
用还会分解细胞膜蛋白等,对细胞造成损伤。
②进行动物细胞培养时不能用胃蛋白酶分散细胞,
主要是因为胃蛋白酶在动物细胞培养环境中失去活性。
第1节 动物细胞工程
一、必备知识
知识点2
干细胞培养及其应用
1.干细胞的主要种类、存在部位及特点
主要
种类
存在
部位
特点
胚胎干细胞(ES细胞)
早期胚胎
具有分化为成年动物体内的任何一种类型的细胞,并进一步形成机体的所有组织和器官甚至个体的潜能,即具有发育全能性
成体干细胞
造血干细胞 神经干细胞 精原干细胞
成体组织或器官内
一般认为,成体干细胞具有组织特异性,只能分化成特定的细胞或组织,不具有发育成完整个体的能力
第1节 动物细胞工程
一、必备知识
知识点2
干细胞培养及其应用
3.诱导多能干细胞(iPS细胞)
(2)应用:治疗小鼠的镰状细胞贫血;现在用iPS细胞治疗阿尔茨海默病、心血管疾病等领域的研究也取得了新进展。
(3)优点:诱导过程无须破坏胚胎,且iPS细胞可来源于病人自身的体细胞,将它移植回病人体内后,理论上可避免免疫排斥反应。
第1节 动物细胞工程
一、必备知识
知识点3
动物细胞融合技术与单克隆抗体
1.动物细胞融合技术
(1)概念:使两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的技术。
(2)原理:细胞膜的流动性。
(3)方法:PEG融合法、电融合法和灭活病毒诱导法等。
特别提醒
①灭活是指用物理或化学手段使病毒或细菌失去感染能力,但并不破坏它们的抗原结构。
②灭活病毒诱导法是诱导动物细胞融合特有的方法,不能用于诱导植物原生质体融合。
第1节 动物细胞工程
一、必备知识
知识点3
动物细胞融合技术与单克隆抗体
1.动物细胞融合技术
(4)灭活病毒诱导细胞融合过程
①动物细胞融合的过程包括细胞膜融合、细胞质融合和细胞核融合。
②经融合处理后的细胞不可以直接用于培养,还需要筛选。因为诱导融合的手段只是促进了细胞间的融合,不能保证所有的细胞都发生融合,融合后形成的细胞也有多种。
(5)结果:形成具有原来两个或多个细胞遗传信息的杂交细胞。
(6)意义:突破了有性杂交的局限,使远缘杂交成为可能。
第1节 动物细胞工程
一、必备知识
知识点3
动物细胞融合技术与单克隆抗体
2.单克隆抗体及其应用
(1)原理
①一种B淋巴细胞只能分泌一种特异性抗体,但B淋巴细胞不能在体外大量增殖。
②骨髓瘤细胞能在体外大量增殖,但不能分泌抗体。
③B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合形成的杂交瘤细胞既能迅速大量增殖,又能产生单一抗体。
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一、必备知识
知识点3
动物细胞融合技术与单克隆抗体
2.单克隆抗体及其应用
(2)制备过程
第1节 动物细胞工程
一、必备知识
知识点3
动物细胞融合技术与单克隆抗体
2.单克隆抗体及其应用
(2)制备过程
筛选1 筛选2
筛选原因
筛选目的
筛选方法
诱导融合后得到多种杂交细胞,另外还有未融合的细胞和同种细胞