备课素材：带宽能否准确反映含量2023—2024学年高二下学期生物人教版选择性必修3

带宽能否准确反映含量 先看一道试题： 为了探究DNA的复制方式，科学家将DNA带15N标记的大肠杆菌（0代）转入以14NH4Cl为唯一氮源的培养液中培养。提取不同培养时期细菌的DNA进行密度梯度超速离心，并绘制了DNA分布情况的示意图，其中A组表示0代与1.9代的DNA混合的结果。下列叙述错误的是（　　） A.图中越靠下的条带密度越大，条带宽度与DNA含量有关 B.图中B组可能表示0代与4.1代的DNA混合之后的分布情况 C.4.1代的条带中宽带理论上约为窄带DNA含量的7倍左右 D.综合0代、1.0代、1.9代、3.0代、4.1代的结果才能证明DNA的半保留复制机制 解析：A、离心法可将密度不同的物质分离开，越靠下的条带密度越大，条带宽度与DNA含量有关，A正确；B、图中B组中轻带的宽度和4.1带的接近，重带的宽度和0代的接近，所以B组可能表示0代与4.1代的DNA混合之后的分布情况，B正确；C、4.0代时，两个DNA条带的含量比值=（24-2）：2=7：1，因此4.1代的条带中宽带理论上约为窄带DNA含量的7倍左右，C正确；D、综合0代、1.0代、1.9代、3.0代就可以证明DNA的半保留复制，D错误。故选：D。 此题涉及DNA的复制密度梯度超速离心带宽与含量的关系。 那么，带宽能否准确反映含量？ 刘本举的教学案例给出了论文中的原始图 仔细看图，还真是有这样的相关性。 这个问题和争论与下面这个问题本质非常相似。如下图： 其实，不论是色素还是DNA，精确的含量测定通常可以用吸光光度法测定，而分离的带宽并不能准确反映含量。 两种测定DNA含量的吸光光度法： 1. 凝胶电泳法：取2-5μlDNA溶解液与0. 4μl 6×载样缓冲液混合，用0.75%琼脂糖凝胶(含EB0.5μg/ml)检测。溴化乙锭可迅速嵌于DNA双螺旋结构中，嵌入DNA中的溴化乙锭受紫外光激发而发出荧光，这种荧光强度与DNA总质量数成正比，通过比较样品与标准品的荧光强度，对样品中的DNA进行定量。 2. 分光光度法，组成DNA的碱基，具有一定的吸收紫外线的特性，其最大吸收值在波长250-270nm之间。这些碱基与戊糖、磷酸形成核苷酸后，其吸收紫外线的特性没有改变，核酸的最大吸收波长为260nm，利用DNA的这个物理特性来测定DNA的浓度。同时可以检测280nm处紫外吸收值，当OD260/OD280的值在1.8-2.0之间时DNA纯度较好，排除蛋白等的污染，可用于PCR等DNA质量要求较高的实验。 ​ 学科网（北京）股份有限公司 $$