内容正文:
第一章
发酵工程
1.2.2 微生物的选择培养和计数
1
1973年,科学家从美国黄石国家公园的热泉中筛选出水生栖热菌( Thermus aquaticus),进而从这种菌中提取出耐高温的DNA聚合酶。这种酶目前已被广泛用于体外扩增DNA片段的聚合酶链式反应(PCR)。
这是因为水生栖热菌能在 70~80 ℃的高温条件下生存,而绝大多数微生物在此条件下不能生存。
讨论
1.为什么水生栖热菌能从热泉中被筛选出来呢?
2.以上例子给我们在分离纯化微生物带来什么启示?
实验室中微生物的筛选,也可以应用同样的原理,即人为提供有利于目的菌生长的条件(包括营养、温度和pH等) ,同时抑制或阻止其他微生物的生长。
一、选择培养基
1.在被石油污染的土壤中可以筛选 微生物
2.在冰川冻土层可以筛选 微生物
3.漆酶属于木质降解酶类,分离产漆酶菌株的首选样品是
生活污水吗?
分解石油
耐寒
不是
现学现用
选择培养基的概念
在微生物学中,将允许 生长,
同时 或 其他种类微生物生长的培养基称为选择培养基。
特定种类的微生物
抑制
阻止
一、选择培养基
选择培养基的类型
类型 条件 分离得到的菌种
改变培养条件 70~80℃的高温
添加某种化学物质 加入青霉素
高浓度食盐
特殊碳、氮源 石油是唯一碳源
营养缺陷 不加碳源
不加氮源
水生栖热菌
酵母菌、霉菌等真菌
金黄色葡萄球菌
能消除石油污染的微生物
自养型微生物
固氮菌
一、选择培养基
怎样选择出抗氨苄(biàn)青霉素能力的细菌?
培养基中加氨苄青霉素
具有抗氨苄青霉素能力的菌落
没有氨苄青霉素抗性的细菌
培养基+氨苄青霉素
培养基
没有抗氨苄青霉素能力的菌落被淘汰
一、选择培养基
思考
怎么证明一个选择培养基具有选择性呢?
应该设置基础培养基(如牛肉膏蛋白胨培养基)或完全培养基作为对照,若基础培养基或完全培养基中生长的菌落数菌多于该选择培养基,则该选择培养基具有选择性。
基础培养基
选择培养基
一、选择培养基
选择培养基配方的设计
尿素[CO(NH2)2]含氮量高,化学性质稳定,是现代农业生产中一种重要的氮肥。尿素施入土壤后,会被土壤中的某些细菌分解成NH3,再被转化为NO3-、NH4+等被植物吸收。而这些细菌之所以能分解尿素,是因为它们能合成脲酶,脲酶催化尿素分解产生NH3,NH3可以作为细菌生长的氮源。
讨论:
1.如果让你配制一种培养基,将土壤稀释液中能分解尿素的细菌分离出来,培养基的配方该如何设计?
2.该培养基与普通培养基有哪些共同点和不同点?
设计一种选择培养基,用尿素作为唯一氮源,可以将分解尿素的细菌分离出来。
这种培养基与普通培养基相比,只是用尿素作为唯一氮源,培养基的其他营养成分基本相同。
思考·讨论
?
一、选择培养基
牛肉膏 5.0g
蛋白胨 10.0g
NaCl 5.0g
琼脂 20.0g
蒸馏水 定容到1000ml
培养基一
KH2PO4 1.4g
NaH2PO4 2.1g
MgSO4·7H2O 0.2g
葡萄糖 10.0g
尿素CO(NH2)2 1.0g
琼脂 15.0g
蒸馏水 定容到1000ml
培养基二
2.从用途上来讲,培养基二属于 培养基,目的是为了获得 。
3.两种培养基共有的培养基成分有: 。
培养基一的碳源为 ,氮源为 ;
培养基二的碳源为 ,氮源为 。
1.从物理性质来讲,两者属于_____培养基,判断依据是__________________,
。该类培养基的主要用途为 。
固体
且比例为1.5%~2%
添加了凝固剂琼脂
分离、鉴定、计数
选择
能分解尿素的微生物
碳源、氮源、无机盐、水
牛肉膏
蛋白胨
葡萄糖
尿素
一、选择培养基
1.为培养和分离出酵母菌并淘汰杂菌,常在培养基中加入
A.较多的氮源物质
B.较多的碳源物质
C.青霉素类药物
D.高浓度食盐
2.能合成脲酶的微生物所需要的碳源和氮源分别是
A.CO2和N2
B.葡萄糖和N2
C.CO2和尿素
D.葡萄糖和尿素
C
D
练习
1g土壤中有多少能分解尿素的细菌?
分离:获得分解尿素的细菌的纯培养物
计数:测定分解尿素的细菌的数量