1.2 微生物的基本培养技术及应用（第2课时 )课件-2023-2024学年高二下学期生物人教版（2019）选择性必修3

培养基的类型 培养基的营养物质 常用的消毒方法 常用的灭菌方法 培养基 无菌技术 煮沸消毒 巴氏消毒 化学药剂消毒 紫外线消毒 湿热灭菌 干热灭菌 灼烧灭菌 按物理性质划分 按功能划分 微生物的基本培养技术 按组成成分划分 基本成分：碳源、氮源、水、无机盐 特殊需求：维生素（如乳酸杆菌）、碱基等 温故知新：培养基的配制和无菌技术 问题1：微生物结构简单、形体微小，眼睛看不到，若想看某种纯净的微生物,当我们掌握了培养基配制和无菌技术后，我们接下来该如何操作？ 第1章 发酵工程 第2节 微生物的基本培养技术及应用 （第2课时） 纯培养物 培养物 纯培养 在微生物学中，将接种于培养基内，在合适条件下形成的含有特定种类微生物的群体 获得纯培养物的过程 由单一个体繁殖所获得的微生物群体 配制培养基 灭菌 接种 分离 培养 纯培养的 步 骤 1.概念 三、微生物的纯培养 【自主探究】请结合教材P10-11面，思考下列问题： 1.获得纯净培养物的关键是什么？ 2.消毒和灭菌的区别是什么？ 3.为了防止杂菌污染，具体措施有哪些？（四个方面） 4.如何针对不同的作用对象选择合适的消毒/灭菌方法？ 三、微生物的纯培养 ——酵母菌的纯培养 平板划线法、稀释涂布平板法 1)原理 微生物群 分散或稀释 单个细胞 单个菌落 繁殖 2)获得单菌落的方法： 单个微生物在培养基表面或内部形成一个肉眼可见的，具有一定形态结构的子细胞群体，叫做菌落。 2.实验 三、微生物的纯培养 称取去皮的马铃薯200g 切成小块 加水1000mL，加热煮沸至马铃薯软烂 用纱布过滤 滤液中加入20g葡萄糖，15~20g琼脂 用蒸馏水定容至1000mL 得到滤液 3.纯培养的步骤： 1.配制培养基： 三、微生物的纯培养 将配制好的培养基转移到锥形瓶中，加棉塞 包上牛皮纸，并用皮筋勒紧 压力100kPa、温度为121℃的条件下，灭菌15 ~ 30min 取5 ~ 8套培养皿 培养皿叠成一束 用几层牛皮纸包紧 放入干热灭菌箱内，160 ~ 170℃灭菌2h 2.灭菌： 3.纯培养的步骤： 三、微生物的纯培养 7 待培养基冷却至50 ℃左右时，在酒精灯火焰附近倒平板。 （二）纯培养的步骤： 3.倒平板： 倒平板注意事项： 温度：50℃左右 冷凝后平板倒置 操作：在酒精灯火焰附近 三、微生物的纯培养 （二）纯培养的步骤： 3.倒平板： 问题1：为什么需要使锥形瓶的瓶口过火焰？ 通过灼烧灭菌，防止瓶口微生物污染培养基 问题2：平板冷凝后，为什么要将平板倒置？ 防止培养基表面的水分过度挥发;防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染 问题3：怎么确定所倒平板未被杂菌污染？ 将所倒平板放入 37℃ 的恒温箱中培养 12∼24 h ，观察是否有菌落存在以确定是否被污染或灭菌是否彻底。 三、微生物的纯培养 平板划线法 单个细胞 微生物群 单个菌落 连续划线 稀释分散 生长繁殖 ①灼烧接种环，直至接种环金属丝烧红 ⑥将皿盖打开一条缝隙，将沾有菌种接种环迅速伸入平板内，划3-5条平行线，盖上皿盖。 ⑤试管口通过火焰，并塞上棉塞 ②在火焰旁冷却接种环，拔出酵母菌培养液试管棉塞 ③试管口通过火焰 ④在火焰附近用接种环蘸取一环菌液 ⑦灼烧接种环，待其冷却后，从第一次划线的末端开始作第二次划线。重复以上操作，作第三、四、五次划线。 4.接种和分离酵母菌： 划3个平板（重复实验）1个不划线（空白对照） 1 2 3 4 5 连续划线法 分区划线法 平板划线法注意事项 （1）接种环只蘸一次菌液,但要在培养基 不同位置连续划线多次 （2）划线首尾不能相接 （3）每次划线前灼烧接种环进行灭菌 （4）划线操作结束后，仍需灼烧接种环 平板划线法 4.接种和分离酵母菌： 平板划线法 4.接种和分离酵母菌： 问题4：在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？ 以免接种环温度太高，杀死菌种。 问题5：在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？ 划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。 问题6：为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时,仍然需要灼烧接种环吗？为什么？ 1 1 2 3 接种前，杀死接种环上的微生物，避免污染培养基 2 杀死残留菌种，确保每次划线菌种来自上次划线的末端 3 划线结束后，杀死残留菌种，避免环境污染和感染操作者 接种环三个不同时期灼烧的目的 划线前 划线时 划线后 平板划线法 （二）纯培养的步骤： 4.接种和分离酵母菌： 13 （二）纯培养的步骤： 5.培养酵母菌： 完成平板划线后，待菌液被培养基吸收，将接