内容正文:
第1章 发酵工程
第2节 微生物的培养技术及应用
传统发酵通常直接利用原材料中天然酵母菌
工业生产通常使用人工选育的高活性酿酒酵母
如何获得纯种酵母菌?
03 微生物的纯培养
1.相关概念
2.微生物纯培养的步骤
(1)培养物:
(2)纯培养物:
(3)纯培养:
获得 的过程。
①配制培养基
②灭菌
③接种
④分离
⑤培养等
三、微生物的纯培养
在微生物学中,将接种于 内,在合适条件下形成的含 的群体。
由 所获得的微生物群体。
纯培养物
培养基
特定种类微生物
单一个体繁殖
课本P11
(1)菌落:分散的微生物在适宜的固体培养基表面或内部可以繁殖形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞群体,这就是菌落。
(2)单菌落:一般是由单个微生物繁殖形成的纯培养物。
(3)特征:
(4)功能:
(4)获得单菌落的方法:
1.实验原理
酵母菌的纯培养
探究 实践
将单个微生物分散在固体培养基上的方法
①稀释涂布平板法、②平板划线法。
大小、形状、隆起程度、颜色等。
鉴定菌种的重要依据
微生物群
分散或稀释
单个细胞
繁殖
单菌落
课本P12
03
酵母菌的纯培养
接种和分离酵母菌
培养酵母菌
灭菌
倒平板
配制培养基
制备培养基
四、方法步骤
课本P12
(1)配制培养基
配制培养基:称取去皮马铃薯200g,切成小块,加水1000ml,加热煮沸至马铃薯软烂,用纱布过滤。向滤液中加入20g葡萄糖、15-20g琼脂,用蒸馏水定容至1000ml。
四、方法步骤
课本P12
(2)灭菌
将配制好的培养基转移到锥形瓶中,加棉塞,包上牛皮纸,并用皮筋勒紧,再放入高压蒸汽灭菌锅中,在压力为100kPa 、温度为121℃的条件下,灭菌15-30min。
将5-8套培养皿包成一包,用几层牛皮纸包紧,放入干热灭菌箱内,在160-170℃ 灭菌2h。
四、方法步骤
课本P12
03 微生物的纯培养
(3)方法步骤:
—③倒平板
注意
待培养基冷却至50 ℃左右时,在酒精灯火焰附近倒平板。
①温度:50℃左右
②操作:在酒精灯火焰附近
③冷凝后平板倒置
防止瓶口微生物污染培养基
既可以防止皿盖上的水珠落入培养基,造成污染,又可以避免培养基中的水分过快挥发。
温度过高容易烫伤,低于50℃琼脂会凝固。
避免杂菌污染。
课本P12
平板划线法
通过接种环在固体培养基表面连续划线的操作,将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面。经过数次划线后培养,可以分离得到单菌落。
单个细胞
微生物群
单个菌落
连续划线
稀释分散
生长繁殖
连续划线法
分区划线法
课本P13
三、微生物的纯培养
①将接种环放在火焰上灼烧,直到接种环的金属丝烧红。
②在火焰旁冷却接种环,并拔出装有酵母菌培养液的试管的棉塞.
③将试管口通过火焰
④将已冷却的接种环伸入菌液中,蘸取一环菌液
⑤将试管口通过火焰,并塞上棉塞
⑥在火焰附近将皿盖打开一条缝隙,用接种环在培养基表面迅速划三至五条平行线,盖上皿盖。
⑦灼烧接种环,待其冷却后,从第一次划线的末端开始作第二次划线。重复以上操作,作第三、四、五次划线。注意不要将最后一次的划线与第一次划线相连。
平板划线法
课本P13
目的:杀死接种环上原有微生物
⑦杀死上次划线接种环上残留的菌种,使下一次划线时菌种来源于末端
三、微生物的纯培养
第1次划线
灼烧接种环灭菌
第2次划线
灼烧接种环灭菌
第3次划线
灼烧接种环灭菌
灼烧接种环灭菌
1
2
3
4
5
①接种环只蘸一次菌液,但要在培养基不同位置连续划线多次;
②划线首尾不能相接;
③每次划线前灼烧接种环进行灭菌;
④划线操作结束后,仍需灼烧接种环,培养皿倒置培养。
分区划线法
平板划线法
接种环共需灼烧几次?
6次
课本P13
目的:杀死接种环上残留的菌种,避免细菌污染环境和感染操作者
3.在划线操作结束时,仍然需要灼烧接种环吗?为什么?
4.在灼烧接种环之后,为什么要等其冷却后再进行划线?
5.在做第二次以及其后的划线操作时,为什么总是从上一次划线的末端开始划线?
6.为什么不能将最后一次的划线与第一次的划线相连?
以免接种环温度太高,杀死菌种。
将聚集的菌体逐步稀释,以便获得单个菌落。
1.为什么在操作的第一步要灼烧接种环?
2.为什么从第二次划线开始,每次划线之前都要灼烧接种环?
杀死接种环上可能存在的微生物
避免残留的菌种污染环境和操作者
如果最后一次划线和第一次划线相连,则增加了细菌的数目,得不到纯化的效果。
取菌种前
杀死上次划线接种环上残留