内容正文:
第二章细胞工程
定义
指应用细胞生物学、分子生物学和发育生物学等多学科的原理和方法,通过细胞器、细胞或组织水平上的操作,有目的地获得特定的细胞、组织、器官、个体或其它产品地一门综合性生物工程
分类
根据对象分:植物细胞工程和动物细胞工程
根据技术分:细胞与组织培养、细胞融合、细胞核移植等
2.1 植物细胞工程
叶原基
芽原基
叶原基只能发育成叶
芽原基只能发育成芽
这能体现细胞的全能性吗?
基因在特定时间、空间条件下选择性表达
细胞全能性
细胞经分化分裂后,仍具有产生完整生物体或分化成其它各种细胞的潜能
植物细胞大多具有全能性
动物细胞的细胞核具有全能性
提问学生我们利用植物细胞全能性帮助兰花大量、快速的繁殖,走入寻常百姓家吗?
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植物细胞工程的基本技术
一、植物组织培养技术:
植物组织培养指离体的植物器官、组织或细胞等,培养在人工配制的培养基上,给予适宜的培养条件,诱导其分化为完整植株的技术。
外植体
接种外植体
诱导愈伤组织
诱导生芽
诱导生根
移栽成活
植物组织培养流程图
外植体
愈伤组织
胚状体
(根、芽)
完整植株
脱分化
在一定的激素和营养等条件的诱导下,使已经分化的细胞失去特有结构和功能转变成未分化的细胞。
无定形,高度液泡化的薄壁细胞
再分化
愈伤组织重新分化成芽、根等器官的过程
植物激素中生长素和细胞分裂素是启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键激素,它们的浓度、比例等都会影响植物的发育方向。
>1
发育成根
<1
发育成芽
严格无菌
菊花的组织培养
1.了解植物组织培养的基本原理。
2.了解生长素和细胞分裂素的浓度、用量的比例对菊
花愈伤组织形成和分化的影响。
3.尝试进行植物组织培养。
实验原理
植物细胞的全能性
实验目的
用酒精擦拭双手和超净工作台台面。将流水充分冲洗后的外植体(幼嫩的茎段)用酒精消毒30s,然后立即用无菌水清洗2 ~ 3次;再用次氯酸钠溶液处理30min后,立即
用无菌水清洗2 ~ 3次。
1
将消毒的外植体置于无菌水的培养皿中,用无菌滤纸吸去表面的水分。用解剖刀将外植体切成0.5 ~ 1cm长的小段。
2
在酒精灯火焰旁,将外植体的1/3 ~ 1/2插入诱导愈伤组织的培养基中。用封口膜或瓶盖封盖瓶口,并在培养
瓶上作好标记。
3
实验步骤
将接种了外植体的锥形瓶或植物组织培养瓶置于18 ~ 22℃的培养箱中培养。在培养过程中,定期观察和记录愈伤组织的生长情况。
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培养15 ~ 20 d后,将生长良好的愈伤组织转接到诱导生芽的培养基上。长出芽后,再将其转接到诱导生根的培养基上,进一步诱导形成试管苗。
5
移栽前先打开封口膜或瓶盖,试管苗在培养箱内生长几日。用流水清洗掉根部的培养基后,将幼苗移植到消过毒的蛭石或珍珠岩等环境中,待其长壮后再移栽入土。每天观察并记录幼苗的生长情况,适时浇水、施肥,直至开
花。
6
1.实验中使用的培养基和所有的器械都要灭菌。接种操
作必须在酒精灯火焰旁进行,并且每次使用后的器械都
要灭菌。
2.接种时注意外植体的方向,不要倒插。
3.诱导愈伤组织期间一般不需要光照,在后续的培养过
程中,每日需要给予适当时间和强度的光照。
外植体
愈伤组织
胚状体
(根、芽)
完整植株
脱分化
再分化
注意事项
若想得到一株地上结番茄,地下长土豆的植株,用传统杂交手段能达到目的吗?
不行,两者存在生殖隔离。
二、植物体细胞杂交技术
1. 定义:
将不同来源的植物细胞,在一定条件下融合成杂种细胞,并把杂种细胞培育成新植物体的技术。
2. 过程:
A细胞
B细胞
A原生质体
B原生质体
去壁
去壁
利用纤维素酶和果胶酶
▲烟草叶肉细胞的原生质体
细胞膜
细胞质
液泡膜
原生质层
2. 过程:
A细胞
B细胞
A原生质体
B原生质体
正在融合
的原生质体
再生出细胞壁
愈伤组织
杂种植株
移栽后的植物
去壁
去壁
组培
关键环节
融合
利用纤维素酶和果胶酶
▲烟草叶肉细胞的原生质体
物理法:
电融合法、离心法
化学法:
聚乙二醇(PEG)融合法、
高Ca2+ —高pH融合法
细胞融合完成的标志
3. 原理:
细胞膜的流动性和植物细胞的全能性
普通小麦—长穗偃麦草
白菜—甘蓝
4. 意义:
打破生殖隔离,实现远缘杂交育种,培育植物新品种
植物细胞工程的应用
一、植物繁殖的新途径
1. 快速繁殖:
用于快速繁殖优良品种的植物组织培养技术,被人们形象地称为植物的快速繁殖技术,也叫作微型繁殖技术。
▲ 蔬菜的微型繁殖生产
不仅可以高效、快速地实现种苗的大量繁殖,还可以保持优良品种的遗传特性。
甘蔗、铁皮石斛、兰花
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2. 作物脱毒:
马铃薯、草莓和香蕉等通常是用无性繁殖的方式进行繁殖的,它们感染的病毒