5.6 组培快繁与苗木脱毒（课件）- 高一《果树生产技术》同步教学（中国农业出版社）

第六节 组培快繁和苗木脱毒 一、组培快繁 组织培养： 在无菌条件下，将离体植 物器官、组织、细胞或原生质体在人工培养 基中培养成完整植株的过程。 微体繁殖： 利用组织培养技术进行果 树繁殖的方法。 微体繁殖特点 占地面积小； 育苗周期短； 适宜繁殖时间长； 繁殖系数大； 可部分或全部脱除病； 技术含量高、需要大量的前期储备工作。 微体繁殖的程序 无菌培养系的建立（外植体的引入） 继代增殖培养 生根培养 组培苗驯化和移栽 1.无菌培养系的建立 （外植体的引入） （1）培养基制备。 （2）外植体引入（接种） 外植体:用于组培的材料称为外植体。 茎尖培养:以茎尖分生组织为外植体 茎段培养:成树枝段为外植体 叶片培养:叶片为外植体 如：苹果M9外植体建立 75%酒精消毒30min结合0.1%升 汞消毒8 min 外植体取样时间、大小，无菌状态是关键！ 2．继代增殖培养（扩繁） 如： MS+6-BA0.6 mg/L+IBA 0.5 mg/L+琼脂7g+蔗糖30g+NAOH 3．生根培养 如： 1/2MS+IBA1.2 mg/L 4．组培苗驯化和移栽 （1）驯化 培养壮苗； 强光闭瓶锻炼； 开瓶锻炼； （2) 过渡移栽， （3）大田移栽。  苹果组培快繁技术体系  SH6 、T337、G.X等苹果矮化砧木组培苗。 二、无病毒苗繁育 （一）果树病毒的种类 侵染果树的病毒和类菌原体种类很多，根据感染后的 表现和特点一般将病毒分为两类。 1.潜隐性病毒 在砧木和接穗都抗病时，感病植株无明显外观症状， 表现为慢性危害，使树势衰退，果实产量、质量、耐贮性 降低，肥水利用率下降,氮肥利用率降低40-60%，减产20- 60%。如苹果褪绿叶斑病毒、茎痘病毒、茎沟病毒。 2.非潜隐性病毒 在感病植株上有明显外观症状，一般容易识别（刨除）。 如苹果锈果病毒、花叶病毒、绿皱果病毒。 据调查，我国苹果产区病毒病危害普遍，不同品种带毒 率30-95%，给生产造成巨大损失。 迄今为止对病毒病无理想的治疗方法和有效药剂。果树 一经感染，就终生带毒。只能通过培育无病毒苗和控制病毒 传播两条途径来减少病毒的危害和扩散。因此，无病毒苗木 的培育具有重要意义 > 田间随机调查1000株花叶病毒，平均株发病率为1.35% 田间调查苹果花叶病毒感染情况 杨陵 洛川 铜川 扶风 乾县 白水 > 品种：  烟富6号、礼泉 短富、爱家的香 、A6 > 矮化砧木  T337、B9、M26 、MAC9 > 成品苗：  礼泉短富590株  烟富6号231株  A6有105株 > 组培砧木苗 脱毒苗经生根、驯化、移栽网室 调查结果 ①苹果花叶病发生普遍：总发病率为30.04％。 各园发病率为8～71.1％，病情指数为50～100% , 个别新建果园的发病率已高达70%。 ②苗圃中病毒病发病率高：调查的一个苗圃中苹果花叶病发生率高达55.8％，所检测的苗木中潜 隐病毒携带率为100% 。苗木带毒对苹果产业发展的潜在危害更大 ③三种潜隐病毒发生普遍且复合侵染率高：100%被测样品均带有至少一种潜隐病毒，复合侵染 率高达60～80%，据此结果及田间调查数据推测所调查的果园中潜隐病毒的带毒率在60~ 80% ，约40%植株带有检疫对象苹果茎沟病毒。 推广无病毒苹果苗木刻不容缓！ （二）无病毒苗木繁育体系 无病毒苗指经过脱毒处理和病毒检测证明 不带指定病毒的苗木。严格讲为脱毒苗 无病毒原种的来源： （1）国内外引进--检测—原种—保存 （2）选择优良母株— 脱毒— 检测— 原种— 保存。 1．无病毒原种的培育和保存 (1) 脱毒： 常用方法有： 热处理 微茎尖培养 热处理与茎尖培养结合 茎尖嫁接 珠心胚实生苗利用（柑橘） 热处理 38℃的高温不仅能延缓病毒的扩散，而且使 器官和组织的生长速度超过病毒的繁殖速度，对 病毒有钝化作用。 在37-38℃高温，60-80%湿度，处理4-9周， 取顶端长出的10-20cm作接穗（旺盛的生长点不带 毒），嫁接后—检测—原种。 l 微茎尖培养 病毒感染后，在植株内分布不均匀，生长点附近的 分生组织（0.1-0.2mm）不含病毒。进行微茎尖培养可获 得无毒原种。 热处理与茎尖培养结合 茎尖嫁接 珠心胚实生苗利用 柑桔、芒果等有多胚现象，其中有性胚中途退化， 由珠心细胞发育成珠心胚（无性胚），与体细胞有相同的 遗传性状。 光照： 10000 lx 温度： 42℃ 剥茎尖准备工作 光照： 10000 lx 温度： 34℃ 显微镜下剥取0.2-0.5mm茎尖  热处理：  组培苗在42/34℃变温热处理 35d以上  剥取茎尖：  剥取 0.2-0.5 mm（关键环节）  茎尖再生：  分化培养基上