2024届高三二轮复习生物：PCR引物设计和定点突变课件

考点一 PCR的引物 PCR定点突变技术——重叠延伸PCR 考点二 ①引物的选择 ②引物的序列推断 ③引物的装饰 引物的5′ 端决定着PCR 产物的长度，它对扩增特异性影响不大。因此，可以被修饰而不影响扩增的特异性。引物5′ 端修饰包括：加酶切位点；标记生物素、荧光、地高辛、Eu3+等；引入蛋白质结合DNA 序列；引入点突变、插入突变、缺失突变序列；引入启动子序列等。 引物 引物的设计： 5` 5` 3` 3` 目的基因 5` 3` 引物的作用：使DNA聚合酶能够从引物的3′端开始连接脱氧核苷酸 ①引物的5’端能与模板链的3’端进行碱基互补配对 ②引物之间或引物内部，不能发生互补配对 ① ② ③ ④ 扩增目的基因用： . 扩增目的基因两侧的序列用： . ②③ ①④ 检测目的基因是否正向插入载体用： . ⑤ ⑥ ⑦ ⑧ ③⑥ ②⑦ 包含目的基因和左侧或者右侧的序列 S z L w h （2023年山东高考）科研人员构建了可表达J-V5融合蛋白的重组质粒并进行了检测，该质粒的部分结构如图甲所示，其中V5编码序列表达标签短肽V5。 (2)构建重组质粒后，为了确定J基因连接到质粒中且插入方向正确，需进行PCR检测，若仅用一对引物，应选择图甲中的引物 。 F2和R1或F1与R2 1．为使甘蓝具有抗除草剂能力，科研人员将除草剂草甘膦抗性基因转入甘蓝植株，获得抗草甘膦转基因甘蓝。（湖南长沙模拟） (1)草甘膦抗性基因一条链的两端序列如下，采用PCR技术获取和扩增草甘膦抗性基因，应选用的引物组合为（ ） A．5′-CTTGGATGAT-3′和5′-TCTGTTGAAT-3′B．5′-CTTGGATGAT-3′和5′-TAAGTTGTCT-3′C．5′-ATTCAACAGA-3′和5′-ATCATCCAAG-3′D．5′-ATTCAACAGA-3′和5′-GAACCTACTA-3′ A 5` 3` CH2 H OH H H H H 碱基 磷酸基团 5’ 4’ 3’ 2’ 1’ 5` 3` 5` 3` 互补 相同 3` 5` 2、(广东汕头二模)木质纤维素是地球上最为丰富的可再生资源，中国科学家利用基因工程的方法构建了一株嗜热厌氧杆菌H，以花生壳、玉米芯等为原料发酵生产生物燃料乙醇，以期提高农业废弃物的整体利用价值。请回答下列问题： (2)基于嗜热厌氧杆菌的特殊代谢能力（图a），研究人员构建了双功能醇醛脱氢酶基因（Adh）的过量表达载体，图b为构建表达载体时所需的关键条件。 ①为保证双功能醇醛脱氢酶基因（Adh）能通过双酶切以正确方向插入质粒，需设计引物1和引物2，其中引物1的序列为5`— —3`。 左边加KpnI识别序列，右边加XbaI识别序列 引物1和上面那条链序列一样 GGTACCGTACCTTTGT 加限制酶识别序列 (2)培育“超级菌”。对菌株WZ改造后的CD3D基因进行研究，把CD3D基因和His标签基因（His标签由6个组氨酸组成）连接起来构建融合基因，并构建重组基因表达载体，图2为载体、CD3D基因的结构、不同限制酶的识别序列及切割位点，欲将标签基因连接在CD3D基因编码区的末端，已知组氨酸的密码子为CAU，终止密码子为UAG。 ①写出His的基因编码链的碱基序列5′— —3′。 His基因 5` 5` 3` 3` 编码链 模板链 mRNA 相同 mRNA U改成T 限制酶识别序列及切割位点： MunI：C↓AATTG； XhoI：C↓TCGAG； BcoRI：G↓AATTC； Sal I：G↓TCGAC (2)培育“超级菌”。对菌株WZ改造后的CD3D基因进行研究，把CD3D基因和His标签基因（His标签由6个组氨酸组成）连接起来构建融合基因，并构建重组基因表达载体，图2为载体、CD3D基因的结构、不同限制酶的识别序列及切割位点，欲将标签基因连接在CD3D基因编码区的末端，已知组氨酸的密码子为CAU，终止密码子为UAG。 ①写出His的基因编码链的碱基序列5′— —3′。②为构建融合基因并将