1.2.2 微生物的培养技术及应用-2023-2024学年高二生物实践教学优质课件（人教版2019选择性必修3）

第一章 发酵工程 第2节 微生物的基本培养技术及应用（2） （1）分散的微生物在适宜的固体培养基表面或内部繁殖形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞群体，即菌落。 （2）单个微生物繁殖形成菌落称为单菌落，纯培养物在固体培养基上通常形成单菌落。 （3）可用平板划线法或稀释涂布平板接种以分离得到单菌落。 （一）实验原理 一、酵母菌的纯培养 平板划线法 接种和分离 制备培养基 培养酵母菌 ①配制培养基 ②灭菌 ③倒平板 稀释涂布平板法 培养 对照 （二）操作步骤 一、酵母菌的纯培养 单击此处编辑母版文本样式 第二级 第三级 第四级 第五级 培养基装入锥形瓶中，加塞子，包牛皮纸 ——高压蒸汽灭菌 培养皿5~8套用牛皮纸包起来 ——干热灭菌 ①拔出锥形瓶的棉塞。 ②将瓶口迅速通过火焰。 ③将培养基倒入培养皿，立即盖上皿盖。 ④待冷凝后，将培养皿倒置。 一、酵母菌的纯培养 待培养基冷却至50℃左右时，在酒精灯火焰旁附近倒平板。倒平板的具体操作步骤如下。 通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。 不要完全打开，以免杂菌污染培养基 既可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染，又可以使培养基中的水分较快地蒸发。 琼脂是一种多糖，在98℃以上熔化，在44℃以下凝固，倒平板时高于50℃会烫手，低于50℃时，若不及时操作，琼脂会凝固。 ③倒平板 一、酵母菌的纯培养 平板划线法：通过接种环在固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面。经过数次划线后培养，可以分离得到单菌落。 连续划线法 分区划线法 一、酵母菌的纯培养 第1次划线 灼烧接种环灭菌 第2次划线 灼烧接种环灭菌 第3次划线 灼烧接种环灭菌 灼烧接种环灭菌 1 2 3 4 5 【平板划线法注意事项】 ①接种环只蘸一次菌液，但要在培养基不同位置连续划线多次； ②划线首尾不能相接； ③每次划线前灼烧接种环进行灭菌； ④划线操作结束后，仍需灼烧接种环，培养皿倒置培养。 分区划线法 ④接种和分离 一、酵母菌的纯培养 是将菌液进行一系列梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。 （系列稀释（梯度稀释）和涂布平板） 梯度稀释 涂布平板 一、酵母菌的纯培养 完成平板划线后，待菌液被培养基吸收，将接种后的平板和一个未接种的平板倒置，放入28℃左右(培养温度因酵母菌种类的不同而稍有差异)的恒温培养箱中培养 24~48h。 警示：在实验室中，切不可吃东西、喝水，离开实验室时一定要洗手，以防止被微生物感染。使用后的培养基在丢弃前一定要进行灭菌处理，以免污染环境。 3.培养酵母菌 (空白对照) 一、酵母菌的纯培养 “酵素”制作就是利用微生物进行无氧呼吸的原理，进行像制作泡菜一样的发酵。这样制作的“酵素”中可能含有一些简单的糖和膳食纤维等、蛋白质(包括多种酶)、有机酸等成分，不存在独有的、特殊的营养物质，其中甚至可能含有微生物发酵产生的有毒物质,食用后可能会危害人体健康。 因此,“吃水果‘酵素’可以美容、减肥、促进消化和提高免疫力”的论点值得怀疑。 评估“水果酵素”的功效是否真实？ 所谓“酵素”，就是“酶”的另一种说法。 二、微生物的选择培养和计数 1973年，科学家从美国黄石国家公园的热泉中筛选出水生栖热菌，进而从这种菌中提取出耐高温的DNA聚合酶。这种酶目前已被广泛用于体外扩增DNA片段的聚合酶链式反应(PCR)。 实验室中微生物的筛选，也可以应用同样的原理，即人为提供有利于目的菌生长的条件(包括营养、温度和pH等) ，同时抑制或阻止其他微生物的生长。 1.为什么水生栖热菌能从热泉中被筛选出来呢？ 这是因为水生栖热菌能在 70~80 ℃的高温条件下生存，而绝大多数微生物在此条件下不能生存。 2.如何从众多的微生物中筛选出单一菌种？ 什么是选择培养基呢？ 二、微生物的选择培养和计数 1.选择培养基 选择培养基：在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称为选择培养基。 原理：人为提供有利于目的菌生长的条件（包括营养、温度和PH等），同时抑制或阻止其他微生物的生长。 耐热微生物 耐寒微生物 石油分解菌 二、微生物的选择培养和计数 思考 选择培养基配方的设计 尿素[CO(NH2)2]含氮量高，化学性质相对稳定，是现代农业生产中一种重要的氮肥。尿素施入土壤后，会被土壤中的某些细菌分解成NH3，NH3再转化为NO-、NH4＋等被植物吸收。而这些细菌之所以能分解尿素，是因为它们能合成脲酶，脲酶催化尿素分解产生NH3，NH3可作为细菌生长的氮源。 CO(NH2) 脲酶 + H2O + CO2 2NH3 NO-、NH4＋ 被植物吸收 尿素分子模型 二、微生物的选择培养和计数 KH2PO4 1.4