内容正文:
第1章 发酵工程
第2节 微生物的培养技术及应用
第2课时 微生物的选择培养和计数
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第1章 发酵工程
课时目标 1.运用适应观,说明选择培养基的原理。(生命观念)
2.采用归纳与概括等方法,阐述测定微生物数量的常用方法。(科学思维)
3.运用稀释涂布平板法,进行细菌分离和计数操作。(科学探究)
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第1章 发酵工程
一、选择培养基
1.概念:在微生物学中,将允许____种类的微生物生长,同时__________其他种类微生物生长的培养基,称为选择培养基。
2.举例:筛选土壤中分解尿素的细菌的选择培育基的特点是以____为唯一氮源。
二、微生物的选择培养
1.方法:____________法。
特定
抑制或阻止
尿素
稀释涂布平板
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第1章 发酵工程
2.过程
0.1
酒精
酒精燃尽
冷却
吸收
恒温培养箱
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第1章 发酵工程
三、微生物的数量测定
1.稀释涂布平板法测定微生物数量
(1)原理:当样品的______足够高时,培养基表面生长的一个单菌落,来源于样品稀释液中的一个____。通过统计平板上的菌落数,就能推测出样品中大约含有多少____。
(2)计数原则
①一般选择菌落数为____________的平板进行计数。样品的稀释度将直接影响平板上的菌落数目,通常选用一定稀释范围的样品液进行培养。
②在同一稀释度下,应至少对__个平板进行重复计数,然后求出______。
稀释度
活菌
活菌
30~300
3
平均值
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第1章 发酵工程
(3)统计结果
①统计结果一般用______而不是用活菌数来表示。
②统计的菌落数往往比活菌的实际数目__。
2.显微镜直接计数法测定微生物数量
(1)统计工具:特定的____计数板或______计数板。
(2)统计方法:在______下观察、计数,然后再计算一定体积的样品中微生物的数量。
(3)统计结果
①一般是______和______的总和。
②统计的菌落数往往比活菌的实际数目__。
菌落数
少
细菌
血细胞
显微镜
活菌数
死菌数
多
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第1章 发酵工程
四、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
1.实验原理:绝大多数微生物都能利用葡萄糖,但是只有能合成____的微生物才能分解尿素。利用以____作为唯一氮源的选择培养基,可以从土壤中分离出分解尿素的细菌。
脲酶
尿素
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第1章 发酵工程
2.方法步骤
中性
菌数落目稳定
特征
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第1章 发酵工程
◆视野拓展
分解尿素的细菌的进一步鉴定
(1)鉴定原理:细菌合成的脲酶将尿素分解成NH3,NH3会使培养基的碱性增强,pH升高。因此,可通过检测培养基pH的变化来判断该化学反应是否发生。
(2)鉴定方法:在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂,培养某种细菌后,如果培养基pH升高,指示剂将变红,可初步鉴定该种细菌能够分解尿素。
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第1章 发酵工程
◆名师点睛
1.有些微生物可以利用其他微生物的代谢产物生长繁殖,因此能在选择培养基上生长的微生物不一定都是所需的微生物,还需进一步验证。
2.当尿素为选择培养基的唯一氮源时,只有能产生脲酶的微生物才能将尿素分解为NH3供自身利用,其他微生物由于缺少氮源而无法生长繁殖。
3.进行土壤取样操作时,取土样时用的铁铲和取样纸袋在使用前都需要灭菌处理。操作完成后,一定要洗手。
4.为排除非测试因素(培养基)的干扰,实验需设置不接种的全营养培养基进行空白对照。
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第1章 发酵工程
5.利用显微镜直接计数本身不能区分细菌的死活,但是,通过一定的辅助处理,可以实现活菌计数,如在计数前用台盼蓝染液进行染色,可以通过统计无色细胞的个数来对活菌进行计数。
6.若实验使用的平板和试管较多,为了避免混淆,最好在使用前做好标记。例如,在标记培养皿时应该注明组别、培养日期和平板上培养样品的稀释度等。
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第1章 发酵工程
◆思维启迪
1.对接种环和涂布器进行灼烧灭菌,在操作上有何区别?
提示:接种环灭菌时,应将接种环放在火焰上灼烧,直到接种环的金属丝烧红;涂布器