1.2.2微生物的培养技术与运用上课课件-2023-2024学年高二下学期生物人教版（2019）选择性必修3

二、微生物的纯培养和计数 纯培养： 获得由单一个体繁殖所得的微生物群体(单菌落)的过程。 微生物群 分散或稀释 单个细胞 繁殖 单菌落 酵母菌的纯培养 原理： 方法：平板划线法和稀释涂布平板法 不同菌落的形状、大小、颜色等不同。 菌落是鉴定菌种的重要依据。 材料用具： 微生物纯培养过程包括： 配置培养基、（调PH、分装）、灭菌、倒平板、接种和分离、培养等步骤 03 1、制备培养基 配制培养基 灭菌 倒平板 倒平板 待培养基冷却至50 ℃左右时，在酒精灯火焰附近倒平板。具体操作步骤如下。 1.拔出锥形瓶的棉塞。 2.将瓶口迅速通过火焰。 3.用拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，将培养基（10 〜 20 mL）倒入培养皿，立即盖上皿盖。 4.等待培养基冷却凝固后，将培养皿倒过来放置。 不要完全打开，以免杂菌污染培养基 低于44 ℃会凝固，温度太高会烫手 倒平板注意事项： ①温度：50℃左右 ②操作：在酒精灯火焰附近 ③冷凝后平板倒置 1、平板冷凝后，为什么要将平板倒置？ ①可以防止皿盖上的水珠落入培养基， ②可以避免培养基中的水分过快蒸发。 问题思考与分析： 问 1.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？ 最好不要用这个平板培养微生物。防止空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生。 2.将制备的空白平板，置于恒温培养箱中培养一段时间，平板上长出了菌落，可能的原因是？ 培养基灭菌不彻底或接种过程中受到杂菌污染 第二步：接种和分离酵母菌 1.方法：平板划线法 通过接种环在固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面。经过数次划线后培养，可以分离得到单菌落。 单个细胞 微生物群 单个菌落 连续划线 稀释分散 生长繁殖 将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面 平板划线的具体操作步骤 ①将接种环放在火焰上灼烧，直到接种环的金属丝烧红。 ②在火焰旁冷却接种环，并拔出装有酵母菌的棉塞。 ③将试管口通过火焰 ④将已冷却的接种环伸入菌液中，蘸取一环菌液。 ⑤将试管通过火焰，并塞上棉塞。 ⑥左手在火焰附近将皿盖打开一条缝隙，右手将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线，盖上皿盖。注意不要划破培养基。 ⑦灼烧接种环，待其冷却后，从第一区域划线的末端开始往第二区域内划线。重复以上操作，在三、四、五区域内划线。注意不要将最后一区的划线与第一区相连。 酵母菌的纯培养 以免接种环温度太高，杀死菌种。 随着划线次数的增加而菌种的数量逐步减少 杀死接种环原有微生物，以免污染培养基。 划3个平板（重复实验）1个不划线（空白对照） 作对照，该培养皿无菌落说明培养基没有污染. 3、酵母菌培养 完成平板划线后，待菌液被培养基吸收，将接种后的平板和一个未接种的平板倒置，放入28℃左右的恒温培养箱中培养24-48h。 用记号笔标记培养皿中菌落皿底上 平板划线法可以对菌种进行分离，不能对培养液中菌种进行计数 细菌：37 ℃ 警示：在实验室中，切不可吃东西、喝水；离开实验室时一定要洗手，以 防止被微生物感染。使用后的培养基在丢弃前一定要进行灭菌处理，以免 污染环境。 第1区划线 接种环灭菌 第2区划线 接种环灭菌 第3区划线 接种环灭菌 接种环灭菌 1 2 3 4 5 ①接种环只蘸一次菌液,但要在培养基不同位置连续划线多次 ②划线首尾不能相接 ③每次划线前对接种环进行灼烧灭菌 ④划线后,培养皿倒置培养。划线操作结束后，仍需灼烧接种环 平板划线法注意事项: 第4区划线 平板划线法 如图所示，接种环共需灼烧几次？ 6次 灼烧时期 目的 ①取菌种前 ②每次划线前 ③接种结束后 杀死接种环上原有微生物，以免污染培养基。 杀死上次划线时残留菌种，使下一次划线的菌种直接来源上次划线的末端。从而通过划线次数的增加，每次划线时菌种的数量逐渐减少，以便得到单个菌落。 杀死接种环上残留的菌种，避免菌种污染环境和感染操作者。 2.在灼烧接种环之后，要等其冷却后再进行划线的原因？ 以免接种环温度太高，杀死菌种。 灼烧接种环的目的: 纯培养： 获得由单一个体繁殖所得的微生物群体(单菌落)的过程。 微生物群 稀释分散 单个细胞 繁殖 单菌落 土壤微生物的纯培养 原理： 方法： 稀释涂布平板法: 是将菌液进行一系列梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。 6支试管，分别加入9ml无菌水 1ml 102 1ml 103 1ml 104 1ml 105 1ml 106 1ml 107 (1)样品梯度稀释： 2.土壤微生物纯培养的操作过程： 将10g土壤加入盛有90mL无菌水的锥形瓶中，