1.2.2 微生物的选择培养好计数课件-2023-2024学年高二下学期生物人教版选择性必修3

第2课时 微生物的选择培养和计数 ①原理：绝大多数微生物都能利用葡萄糖，但是只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素。利用以尿素作唯一氮源的选择培养基，可以从土壤中分离出分解尿素的细菌。 1.培养基的制备 ②配方： 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 探究▪实践 葡萄糖 10.0g 尿素 1.0g KH2PO4 1.4g Na2HPO4 2.1g MgSO4·7H2O 0.2g 琼脂 15.0g 蒸馏水 1000ml 制备选择培养基（尿素为唯一氮源） 制备牛肉膏蛋白胨培养基 用牛肉膏蛋白胨培养基作为对照组， 用以尿素为唯一氮源的培养基做实验组， 用来判断选择培养基是否具有选择作用。 ①提供无机盐； ②调节pH。 阅读教材第19页“实验设计”和“操作提示”相关知识，找出实验操作的主要步骤和操作要点 土壤取样 ①要求：富含有机质、酸碱度接近______且潮湿的土壤 ②取样土层：铲去_________，在距地表3~8cm的土壤层 制备培养基 ①实验组：以尿素为唯一氮源的选择培养基 ②对照组： 样品的稀释 牛肉膏蛋白胨培养基(普通培养基） 目的：作为对照组用以判断选择培养基是否具有选择作用 涂布平板 2.实验设计流程 中性 表层土 ①稀释原因：样品的稀释程度直接影响平板上生长的菌落数 ②稀释标准：测定土壤中的细菌的数量，一般选用_____________________________倍 稀释液进行平板培养 1×104、1×105和1×106 ③初次实验，可以将稀释的范围放宽一点，例如可以将___________________倍稀释液 分别涂布培养，以保证___________________________________________。 1×103~1×107 能从中选择出菌落数为30~300的平板进行计数 测细菌数：一般用104、105、106稀释液 测放线菌：一般用103、104、105稀释液 测真菌数：一般用102、103、104稀释液 涂布平板 每个稀释浓度至少设置4个平板。 1、2、3平板是 ______培养基（_____组，三个重复），4为________________培养基，目的：用以 _____________________________。 思考1：另外，整个实验还要设置2个平板（对照组），是哪两个目的？ （1）另设置2个平板： ①未涂布（未接种)的选择培养基 ②未涂布的牛肉膏蛋白胨培养基； （2）目的：以验证培养基中是否含有杂菌； 与接种的选择培养基形成对照 与接种的牛肉膏蛋白胨培养基形成对照 判断选择培养基是否具有选择作用 选择 实验 牛肉膏蛋白胨 菌落计数 当菌落数目稳定时，选取菌落数在30~300的平板进行计数，同一稀释度下至少计数3个平板，求出平均值，并根据所对应的稀释度计算出样品中细菌的数目。设计如下表格记录并计数。 稀释度 104 105 106 1 2 3 平均值 1 2 3 平均值 1 2 3 平均值 每个平板的菌落数 培养与观察 将平板____于________℃的恒温培养箱中培养1~2天。每隔24小时统计一次菌落数目,选取________________时的记录做结果 倒置 30~37 菌落数目稳定 为什么？ 防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。 (1)无菌操作: (2)做好标记: (3)规划时间: 本实验耗时较长，需要事先规划时间，以便提高实验效率，在操作时有条不紊。 ①取土样的用具在使用前都需要 。 ②实验操作均应在 _______ 进行。 3.操作提示 灭菌 酒精灯火焰旁 本实验使用的平板和试管较多，为避免混淆，最好在使用前做好标记。例如，在标记培养皿时应该注明组别、培养日期和平板上培养样品的 ______ 等。 稀释度 如果是用同一土样进行的操作，数据应该比较接近。如果差异很大，就需要从操作是否规范、培养基配制是否合理等方面查找原因。 4.结果分析与评价 如果没有接种的培养基上没有菌落生长，说明培养基没有被杂菌污染。如果接种后的完全培养基上的菌落数明显多于选择培养基上的菌落数，说明选择培养基筛选出了一些尿素分解菌。 1. 结合对照组，分析培养物中是否有杂菌污染以及选择培养基是否筛选出一些菌落。 如果得到了两个或多个菌落数为30-300的平板，说明稀释度合适，操作比较成功，能够进行菌落的计数。 2. 你是否获得了某一稀释度下菌落数 为30～300的平板？在这一稀释度下，是否至少有2个平板的菌落数接近？ 3. 你统计的每克土样中能分解尿素的细菌的菌落数是多少？与其他同学统计的结果接近吗？如果差异很大，可能是什么原因引起的？ 8 甲、乙两位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数。从对应稀释倍数