专题05 基因工程大题常见填空和实验设计-备战2024年高考生物二轮专题复习课件

沈晓花 二轮复习 基因工程大题 1 DNA RNA 蛋白质 转录 翻译 复制 逆转录 复制 中心法则： 作用 1、限制酶的作用： 3、引物的作用： 4、启动子的作用： 5、终止子的作用： ----二苯胺试剂 ----琼脂糖凝胶电泳 ----PCR、分子杂交 ----PCR、分子杂交 ----抗原-抗体杂交 鉴定 1、DNA粗提取产物 2、PCR扩增产物 3、染色体DNA是否插入目的基因 4、目的基因是否转录出mRNA 6、转基因生物是否表达遗传特点 5、目的基因是否表达出蛋白质 ----抗性接种实验 2、标记基因的作用： 能识别双链DNA分子的特定核苷酸序列，并且使每一条链 中特定部位的磷酸二酯键断开。 便于重组DNA分子的筛选 使Taq酶能够从引物的3'端开始连接脱氧核苷酸    RNA聚合酶的识别和结合的部位，驱动基因转录出mRNA 使转录在需要的地方停下来 目的 1、PCR扩增仪的温度升高到90℃的目的： 2、PCR扩增仪的温度下降到50℃左右的目的： 3、PCR扩增仪的温度上升到72℃左右的目的： 使双链DNA解聚为单链 使两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合 使溶液中的4种脱氧核苷酸在耐高温的DNA聚合酶的作用下， 根据碱基互补配对原则合成新的DNA链。 基因工程的步骤 1、目的基因的筛选与获取 2、基因表达载体的构建（核心） 3、将目的基因导入受体细胞 4、目的基因的检测与鉴定 限制酶、DNA连接酶 逆转录酶、耐高温的DNA聚合酶 基因表达载体的构建用到的酶： 。 目的基因是否转录出mRNA,用PCR检测时用到的酶： 。 利用Ti质粒将目的基因 导入受体细胞 Ca2+处理法 农杆菌转化法 -----将含目的基因的重组Ti质粒导入农杆菌。 -----将含目的基因的T-DNA导入植物细胞、 并整合到该细胞的染色体DNA上。 启动子、终止子是启动转录和终止转录的DNA序列 起始密码子、终止密码子是启动翻译和终止翻译的RNA序列 区别 导入方法 将目的基因导入植物细胞 将目的基因导入动物细胞 将目的基因导入微生物细胞 农杆菌转化法 花粉管通道法 ——显微注射法 ——Ca2+处理法 6 判断 1、T-DNA可将基因G转移并整合到愈伤组织细胞的染色体DNA上 2、愈伤组织重新分化为芽、根等器官的过程中，不需要添加植物激素 3、基因突变是不定向的而基因编辑能定向改变基因 4、工厂化生产紫杉醇需将改造后的红豆杉细胞培养至愈伤组织 5、淋巴细胞能提取到干扰素mRNA，而肝脏细胞或肌肉细胞不能，造成这些细胞在形态、结构和功能上存在差异的根本原因是_________。 6、PCR过程每次循环分为3步，其中发生引物与单链DNA结合的步骤称为__________得到的产物一般通过___________的方法来鉴定。 7、在构建重组质粒过程中，需用到的工具酶有_________。 8、干扰素在体外保存相当困难。但如果将干扰素分子的一个半胱氨酸替换为丝氨酸，则这种改造的干扰素可在-70℃条件下保存半年，这属于__________工程应用的领域。 √ × √ √ 基因的选择性表达 复性 限制酶和DNA连接酶 琼脂糖凝胶电泳 蛋白质 表面展示技术是通过重组DNA技术，将外源蛋白与细胞表面的蛋白质组装成融合蛋白，从而可展示在细胞表面。回答下列问题。 (1)若要将芽孢表面蛋白基因cotB与外源的绿色荧光蛋白基因gfp构建成基因表达载体，下图中最适合通过绿色荧光（绿色荧光蛋白在紫外光下会产生绿色荧光）确定融合蛋白成功表达的是_____。 C． D． C 注：Ampr为氟卡青霉素抗性基因；→表示转录方向； UAG，UAA，UGA是终止密码子，AUG是起始密码子。 表面展示技术是通过重组DNA技术，将外源蛋白与细胞表面的蛋白质组装成融合蛋白，从而可展示在细胞表面。回答下列问题。 (2)芽孢表面蛋白是实现表面展示技术的关键蛋白，结合上述材料，试分析该蛋白在表面展示技术中的作用是_________。 (3)导入基因表达载体后的芽孢杆菌接种在含有____________的固体培养基上，以获得携带载体的单菌落，该过程被称为微生物的___________培养。 (4)培养基中可能既有含基因表达载体的单菌落，也有含_________的单菌落，因此还需要对DNA进行提取，常用酒精初步分离DNA和蛋白质，这里酒精的作用原理是_____________。 (5)若要确定表面展示技术在芽孢杆菌上构建成功，应在紫外光环境下对其进行______水平的检测。 芽孢表面蛋