内容正文:
1.2 微生物
的培养技术及应用
微生物的基本培养技术
一、微生物
难以用肉眼观察的微小生物的统称。
2、微生物的类群
1、概念
原核生物(细菌、蓝细菌等)
真菌(如酵母、霉菌等)
原生生物(草履虫、衣藻等)
SARS病毒
蓝细菌
草履虫
青霉菌
病毒
微生物
培养条件:
提供合适的营养和环境条件
确保其它微生物无法混入
培养基
无菌技术
1、培养基的概念及其作用;
2、培养基的种类;
3、培养基的营养构成。
一、培养基的配制(9-10)
一 微生物的基本培养技术
一、培养基的配制
1.培养基的概念:
人们按照微生物对营养物质的不同需求,配制出供其生长繁殖的营养基质。
2.作用:
用以培养、分离、鉴定、保存微生物或积累其代谢物。
3.培养基种类(按物理性质分类)
固体培养基
液体培养基
加入凝固剂(如琼脂)
(1)固体培养基中的琼脂仅作为凝固剂,不能为微生物生长提供能量和碳源。
(2)病毒为非细胞结构生物,只能在活细胞中营寄生生活,目前不能利用人工培养基来培养。
(1)按物理性质分类
(2)按功能分类
选择培养基
鉴别培养基
:人为提供有利于目的菌生长的条件,同时抑制或阻止其他微生物的生长。
:用于鉴别不同类型微生物的培养基。
4.培养基的营养构成
(1)主要营养物质:
水、碳源(提供碳元素的物质)、氮源(提供氮元素的物质)和无机盐等营养物质。
(2)某种常见的细菌培养基
——牛肉膏蛋白胨培养基的营养构成
组分 含量 提供的主要营养
牛肉膏 5 g 碳源、氮源、磷酸盐和维生素等
蛋白胨 10 g 碳源、氮源和维生素等
NaCl 5 g 无机盐
H2O 定容至1 000 mL 水
(3)还需满足微生物对pH、特殊营养物质以及O2的需求。
例如:
①在培养乳酸杆菌时,需要在培养基中添加维生素;
②在培养霉菌时,一般需要将培养基调至酸性;
③在培养细菌时,一般需要将培养基调至中性或弱碱性;
④在培养厌氧微生物时,需要提供无氧的条件。
思考题:
1、为什么培养基要加氮源?
2、是否所有培养基都要加碳源、氮源?
培养基中的氮元素是微生物合成蛋白质、核酸等物质所必需的。
例如:分离固氮菌不需要额外添加氮源,其可以直接利用空气中的氮气。
不是;
分离自养型生物不需要额外添加碳源,其能利用无机碳源合成含碳有机物。
二、无菌技术
获得纯净的微生物培养物的关键是防止杂菌污染,主要包括消毒和灭菌。
阅读10-11页,找出:
(1)消毒的概念、适用对象及其主要方法;
(2)灭菌的概念、适用对象及其主要方法;
二、无菌技术
1.消毒
(1)概念:
指使用较为温和的物理、化学或生物等方法杀死物体表面或内部一部分微生物。
(2)适用对象:
操作的空间、操作者的衣着和手等。
(3)主要方法:
煮沸消毒法、巴氏消毒法、紫外线消毒法、化学药物消毒法等。
消
毒 主要方法 具体操作 应用范围
巴氏
消毒法
煮沸
消毒法
紫外线
消毒法
化学药物
消毒法
消毒的主要方法及应用范围
63~65 ℃消毒30 min
72~76℃处理15s
80~85 ℃处理10~15s
牛奶、啤酒、果酒和酱油等不耐高温的液体
100 ℃煮沸5~6 min
家庭餐具等生活用品
紫外灯照射30 min(损伤细菌的DNA结构)(喷洒苯酚或煤酚皂)
接种室、接种箱或超净工作台
酒精
氯气
双手、伤口(酒精)
有活性的生物材料(次氯酸钠)
水源(氯气)
2.灭菌
(1)概念:
指使用强烈的理化方法杀死物体内外所有的微生物,包括芽孢和孢子。
(2)适用对象:
用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等。
(3)常用方法:
湿热灭菌、干热灭菌和灼烧灭菌等。
灭菌 主要方法 具体操作 应用范围
灼烧
灭菌
干热
灭菌
灭菌的主要方法及应用范围
直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧
涂布器、接种环、接种针或其他金属用具,试管口或瓶口等
干热灭菌箱中,160~170 ℃的热空气中维持1~2 h
耐高温的、需要保持干燥的物品,如玻璃器皿、金属用具等
100 kPa、121 ℃维持15~30 min
培养基、无菌水等
湿热灭菌
(高压蒸汽灭菌效果最好
干热灭菌箱
灼烧
灭菌
高压蒸汽灭菌锅
3.比较消毒和灭菌
项目 消毒 灭菌
作用强度
消灭微生物
的数量
能否消灭
芽孢、孢子
适用对象
常用方法
较为温和的物理、化学或生物
强烈的物化方法
物体表面或内部一部分微生物
物体内外的
所有微生物
消灭全部
芽孢和孢子
操作空间、操作
者的衣着和手等
接种环、接种针、
玻璃器皿、培养基等
煮沸消毒法、巴氏
消毒法、化学药物
消毒法、紫外线消毒法
灼烧灭菌、干热灭菌、
湿热灭菌
课前阅读
什么种类的培养