内容正文:
必修2
第3章
第3节
DNA的复制
DNA
Copy
导入
沃森和克里克1953年发表在Nature上的揭示DNA为双螺旋结构的文章
讨论
这句话中为什么要用“可能”两个字?这反应了科学研究具有什么特点?
科学研究需要大胆的想象,但是得出结论必须建立在确凿的实验证据之上。
沃森&克里克的观点:半保留复制
DNA复制时,DNA双螺旋解开,互补的碱基间氢键断裂,解开的两条单链分别作为复制的模板,游离的脱氧核苷酸根据碱基互补配对原则,通过形成氢键结合到作为模板的单链上。由于新合成的每个DNA中都保留了原来DNA中的一条链,这种复制方式称作半保留复制。
对DNA复制的推测
其他观点:全保留复制
对DNA复制的推测
全保留复制是指DNA复制以DNA双链为模板,子代DNA的双链都是新和成的。
对DNA复制的推测
其他观点:分散复制
分散复制是指分散复制是指复制后的DNA的两条链都包含亲代的片段与新合成的片段
到底哪一种假说是正确的呢?
15N(有放射性)、 14N (没有放射性)
DNA半保留复制的实验证据
(1)科学家:美国生物学家梅尔尼森&斯塔尔
(2)需解决的核心问题:亲代中的DNA如何到子代中去?
(3)实验思路:区分亲、子代的DNA
(4)技术:同位素标记技术&密度梯度离心
用到的同位素:
①同位素标记技术
15N 和 14N是N元素的两种稳定同位素,这两种同位素的相对原子质量不同,含15N的DNA比含14N的DNA密度大,因此,利用离心技术可以在试管中区分含有不同N元素的DNA。
②密度梯度离心
用一定的介质在离心管内形成一连续或不连续的密度梯度,将细胞混悬液或匀浆置于介质的顶部,通过重力或离心力场的作用使细胞分层、分离。
15N / 15N
全保留复制
15N / 15N
14N / 14N
15N / 14N
15N / 14N
15N / 15N
半保留复制
15N / 15N
分散复制
15N / 14N
15N / 14N
(5)研究对象:大肠杆菌
思考:使用大肠杆菌作为研究对象的好处是什么?
繁殖快、易培养
思考:何如标记亲、子代的DNA?
用含有15N和14N的营养物质培养大肠杆菌即可,在大肠杆菌繁殖后就会带上被标记的DNA。
思考:何如区分受标记的DNA?
15N和14N相对原子质量不同
思考:使用密度梯度离心法后三种类型的双链应处在什么位置?
重: 15N / 15N
中: 15N / 14N
轻: 14N / 14N
下方
中间
上方
①用含有15NH4Cl 的培养液培养大肠杆菌,让其繁殖若干代
让亲代DNA的每一条链(母链)被15N标记。
思考:这样做的目的是什么?
(6) 实验过程:
15NH4Cl
②提取大肠杆菌的DNA,并进行离心
思考:观察到的实验结果是怎样的?
③用含有14NH4Cl 的培养液培养大肠杆菌,让其繁殖一代
14NH4Cl
14NH4Cl为DNA子链合成提供原料,让新合成的子链DNA获得14N标记,为排除全保留复制。
思考:这样做的目的是什么?
思考:如何保证细胞分裂一次?
E.coli 20min 分裂一代
重:15N / 15N
④提取大肠杆菌的DNA,并进行离心
思考:观察到的实验结果是怎样的?
中:14N / 15N
14NH4Cl
⑤让大肠杆菌在14NH4Cl 的培养液中再繁殖一代
14NH4Cl为DNA子链合成提供原料,检查新合成的子链DNA是否会出现14N / 14N标记,排除分散复制。
思考:这样做的目的是什么?
⑥提取大肠杆菌的DNA,并进行离心
思考:观察到的实验结果是怎样的?
中:14N / 15N
轻:14N / 14N
证明:DNA的复制方式是半保留复制
注意
中:14N / 15N
中:14N / 15N
14N / 15N
中:14N / 15N
第二代的条带比第一代偏上
分散复制情况分析:
作出假说
演绎推理
实施实验,统计结果
根据假说演绎推理两种复制模型得到的子代DNA的结果
实验验证
观察DNA的结构,DNA是如何复制的?
提出问题
半保留复制
全保留复制
分散复制
假说——演绎法
DNA复制方式的探究历程:
得出结论
DNA是半保留复制的
DNA的复制过程
1.概念:
以亲代DNA为模板合成子代DNA的过程。
2.时期:
真核生物:有丝分裂间期、减数第一次分裂前的间期。
3.场所:
真核细胞:主要在细胞核(线粒体、叶绿体中也存在)。
原核细胞:主要在拟核(质粒中也存在)。
病毒:在宿主细胞中。
4.过程:
解旋
↓
合成子链
↓
重新螺旋
4.具体过程:
能量
解旋
脱氧核糖核苷酸
DNA聚合酶、DNA连接酶、ATP水解酶
双螺旋结构
解旋和复制的过程是同时进行的
思考
Q4:氢键的形成需要酶的催化吗?
Q1:解旋过程中解旋酶破坏