2.2.1 动物细胞培养-2023-2024学年高二生物同步优选备课一点通（人教版2019选择性必修3）

第2章 细胞工程 2.2 动物细胞工程 第1课时 ——动物细胞培养 培养皿 培养瓶 常用的技术：动物细胞培养、动物细胞融合和动物细胞核移植等， 其中动物细胞培养是动物细胞工程的基础。 人造皮肤 人造皮肤：人体再生术的秘密 在治疗大面积烧伤时，通常采用的办法是取烧伤病人的健康皮肤进行自体移植。但对这样的病人来说，自体健康皮肤非常有限，使用他人皮肤来源又不足，而且产生免疫排斥反应。那么，怎样才能获得大量的自体健康皮肤？能不能用自体皮肤的单个细胞培养出可供移植的皮肤？ 可以从病人身上取少量正常、健康的皮肤在体外进行培养、扩增。目前，科学家还在研究对皮肤干细胞进行培养，以获得适合临床上使用的人造皮肤。 从社会中来 从动物体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后在适当的培养条件下，让这些细胞生长和增殖的技术。 2.目的： 获得细胞或细胞产物；不能获得完整动物个体。 3.原理： 细胞增殖（有丝分裂） 动物细胞培养需要哪些必要的条件？ 一、动物细胞培养概念 1.概念： 4.地位： 动物细胞工程的基础 5.过程中的关键操作： 原代培养和传代培养 4 1. 营养： 2. 无菌、无毒的环境： ①合成培养基+动物血清等。 ②动物血清作用：含多种维持细胞正常代谢和生长的物质，如蛋白质、氨基酸、未知的促生长因子等。 ③一般使用液体培养基，也称为培养液。 3. 温度、PH和渗透压： 温度36.5+0.5度，pH7.2～7.4，也需考虑渗透压因素。 4. 气体环境： O2和CO2（95%空气和5% CO2 ） 各自作用？ 二、动物细胞培养的条件 ①培养液和所有培养用具灭菌处理，无菌操作。 ②添加一定量的抗生素：防止培养过程中的微生物污染。 ③定期更换培养液：目的？ 维持细胞正常的形态和功能 5 为什么对动物细胞进行培养时通常要添加血清？ 1、血清中含有蛋白质、氨基酸、葡萄糖、激素等。 2、氨基酸有多种，是细胞合成蛋白质的基本成分，其中有些氨基酸动物细胞本身不能合成（称为必需氨基酸），必须由培养液提供。 3、血清激素有胰岛素、生长激素等及多种生长因子；血清还含有多种未知的促细胞生长因子、促贴附因子及其他活性物质，能促进细胞的生长、增殖和贴附。 4、因此，细胞培养时，要保证细胞能够顺利生长和增殖，一般需添加 10%～20%的血清。 5、血清中含有多种未知的促细胞生长因子等营养物质，这是细胞生长 和增殖所必需的。 细胞培养的过程是怎样的？ 6 取动物组织 制成细胞悬液 转入培养液原代培养 分瓶 传代培养 三、动物细胞培养的过程 关键词：①细胞贴壁②接触抑制③原代培养④传代培养 取动物组织 制成细胞悬液 转入培养液进行原代培养 放入CO2培养箱中培养 传代培养 放入CO2培养箱中培养 （1）取材: 动物胚胎或幼龄动物。 细胞分化程度低，分裂能力强，容易培养。 三、动物细胞培养的过程 1.取动物组织 （2）取材原因: 2.制成细胞悬液 （1）为什么将组织分散成单个细胞？ （2）将组织分散成单个细胞的方法？ （3）制成细胞悬液的步骤？ ⑶酶解法较温和，一定不会对动物细胞造成损伤，对吗？ 动物细胞间的物质主要是蛋白质。 不可以；胃蛋白酶作用的适宜pH约为2，当pH大于6时，胃蛋白酶就会失去活性，多数动物细胞培养的适宜pH为7.2-7.4，胃蛋白酶在此环境中没有活性，所以用胃蛋白酶不行。 不对；使用胰蛋白酶时，要控制好作用时间，因为胰蛋白酶不仅能分解细胞间的蛋白质，长时间作用还会分解细胞膜蛋白等，对细胞造成损伤。 三、动物细胞培养的过程 ⑵可以用胃蛋白酶处理吗？为什么？ ⑴用胰蛋白酶分散细胞，可以说明什么问题？ “细胞增殖到互相接触的时候，糖蛋白识别了这种信息，就会使细胞停止继续繁殖，出现接触抑制的现象”。试结合上述解释，举例说明哪种细胞无接触抑制现象，并阐述原因。 癌细胞； 癌细胞的细胞膜上糖蛋白等物质减少 （1）具体做法 （2）体外培养细胞的两大类 （3）两类细胞的生长特点 ：①悬浮生长类；②贴壁生长类 三、动物细胞培养的过程 3.原代培养 4.分瓶、传代培养 （1）需分瓶进行传代培养的原因？ （2）分瓶的具体做法 ？ 三、动物细胞培养的过程 思考： ⑴离心的作用？ ⑵动物细胞培养技术有没有体现动物细胞的全能性？ 在沉淀中得到细胞，同时去掉上清液中的胰蛋白酶 未体现 动物细胞培养只是细胞增殖的过程。 不可以； 细胞的传代培养一般传至10代后就不易传下去，这时细胞能保持细胞正常的二倍体核型； 传至10-50代左右时，增殖会逐渐缓慢，以至于完全停止，这时部分细胞的细胞核型可能会发生变化，这一阶段的细胞称为细胞