1.2.2 微生物的选择培养和计数-【生物好课】2023-2024学年高二生物下学期同步优质课件（人教版2019选择性必修3）

第1章 发酵工程 第2节 微生物的培养技术及应用 二 微生物的选择培养和计数 一、选择培养基 自然界中微生物数量繁多，种类庞杂，要想从中分离出需要的特定微生物并不容易，尤其当要分离的微生物在混合菌群中不是优势种群时，仅通过一般的平板划线法或稀释涂布平板法很难实现。 1973年，科学家从美国黄石国家公园的热泉中筛选出水生栖热菌，进而提取出耐高温的DNA聚合酶。 为什么水生栖热菌能从热泉中筛选出来呢？ 这是因为水生栖热菌能在70-80℃的高温条件下生存，而绝大多数微生物在此条件下不能生存。 根据微生物对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。 实例：寻找耐高温的DNA聚合酶 一、选择培养基 1.实验室中微生物筛选的原理 人为提供_____________________的条件（包括_______、_______和_____等），同时_________________________________。 有利于目的菌生长 抑制或阻止其他微生物的生长 营养 温度 pH 2.选择培养基的概念 在微生物学中，将允许____________________生长，同时______或_______其他种类微生物生长的培养基称为选择培养基。 特定种类的微生物 抑制 阻止 培养基 培养基+ 氨苄青霉素 长出各种各样的细菌 具有抗氨苄青霉素能力的菌落 没有抗氨苄青霉素能力的菌落被淘汰 怎样选择出抗氨苄青霉素能力的细菌? 一、选择培养基 3.类型: （1）改变培养条件。 70～80℃的高温 分离耐高温的水生栖热菌 使用将pH调至酸性的培养基 分离耐酸菌 （2）改变培养基中的营养成分。 不加碳源（含碳有机物）的培养基 不加氮源的培养基 分离出固氮菌 分离出自养型微生物 （3）添加某种化学物质。 加入青霉素 分离酵母菌、霉菌等真菌 加入高浓度食盐的培养基 分离得到金黄色葡萄球菌 一、选择培养基 思考∙讨论 选择培养基配方的设计 尿素［CO(NH2)2］含氮量高，化学性质稳定，是现代农业生产中一种重要的氮肥。 尿素施入土壤后，会被土壤中的某些细菌分解成NH3，再被转化为NO3-、NH4+等被植物吸收。而这些细菌之所以能分解尿素，是因为它们能合成脲酶。 CO(NH2)2 脲酶 + H2O + CO2 2NH3 在选择培养基中，以尿素作为唯一氮源，只有能合成脲酶的细菌才能生长发育繁殖。 1.将土壤稀释液中能分解尿素的细菌分离出来，培养基的配方该如何设计？ 2.该培养基与普通培养基有哪些共同点和不同点？ 除以尿素作为唯一氮源外，该培养基的其他营养成分与普通培养基基本相同。 一、选择培养基 只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，缺乏脲酶的微生物不能分解尿素，而缺乏氮源的微生物是不能生长发育繁殖的。 利用以尿素作唯一氮源的选择培养基，可以从土壤中分离出分解尿素的细菌。 配方： 葡萄糖 10.0g 尿素 1.0g KH2PO4 1.4g Na2HPO4 2.1g MgSO4·7H2O 0.2g - 琼脂 15.0g 蒸馏水 1000ml - 思考∙讨论 选择培养基配方的设计 应该设置基础培养基或完全培养基作为对照，若基础培养基或完全培养基中生长的菌落数菌多于该选择培养基，则该选择培养基具有选择性。 怎么证明一个选择培养基具有选择性呢？ 碳源 氮源 提供无机盐，调节pH 凝固剂 二、微生物的选择培养 由于土壤细菌的数量庞大，要想得到特定微生物的纯培养物，必须要对土壤进行__________，然后再将菌液_______到制备好的______________上。 充分稀释 涂布 选择培养基 如果想知道1g土壤中有多少能分解尿素的细菌，仅有选择培养基是不够的，还需要对土样进行适当的处理以及科学的测定微生物数量的方法。 主要过程: A. 梯度稀释菌液 B. 涂布平板 二、微生物的选择培养 A.梯度稀释菌液 将10g土样加入盛有90mL无菌水的锥形瓶中，充分摇匀。取1mL上清液加入盛有9mL无菌水的试管中，依次等比稀释。 1×10 1 mL 1 mL 1 mL 1 mL 1 mL 1 mL 1×102 1×103 1×104 1×105 1×106 1×107 9 mL 无菌水 90mL无菌水 二、微生物的选择培养 取0.1mL菌液，滴加到培养基表面。 将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中。 将涂布器放在火焰上灼烧，待酒精燃尽、涂布器冷却后，再进行涂布。 用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。涂布时可转动培养皿，使涂布均匀。 待涂布的菌液被培养基吸收后，将平板倒置，培养。 微量移液器 B.涂布平板 二、微生物的选择培养 注意事项： 10g土样加入盛有90mL无菌水中后，已稀释10倍，再计算时，不要忽略； 由于使用的是选择培养基，所以一