内容正文:
第3章 基因工程
第1节 重组DNA技术的基本工具
什么是基因工程?
基因工程是如何进行操作的?
科技探索之路 | 基因工程的诞生和发展
基因工程
按照人们的愿望,通过转基因等技术,赋予生物新的遗传特性,创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。从技术操作层面看,由于基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的,因此又叫作重组DNA技术。
操作对象及环境
操作水平
操作原理
结果
基因
DNA分子水平
赋予生物新的遗传特性,创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。
基因重组
优点:
能克服远缘杂交不亲和的障碍;
定向改造生物的遗传特性。
1.为什么不同生物的DNA分子能拼接起来?
(1)DNA的基本组成单位都是 。
(2)双链DNA分子的空间结构都是 。
2.为什么一种生物的基因可以在另一种生物细胞内表达?
(1) 是控制生物性状的独立遗传单位。
(2)遗传信息的传递和表达都遵循 。
(3)生物界共用一套 。
四种脱氧核苷酸
规则的双螺旋结构
基因
中心法则
遗传密码
基因工程理论基础的分析
1’
2’
3’
4’
5’
脱氧核苷酸
聚合成
3’
5’
一条脱氧核苷酸链
3’,5’-磷酸二酯键
形成
两链之间:
A、T间形成2个氢键,C、G间形成3个氢键
A
C
T
G
DNA双链平面结构
--
--
--
--
--
“分子手术刀”
准确切割DNA分子
“分子缝合针”
“分子运输车”
将DNA片段连接起来
将体外重组好的DNA分子导入受体细胞
重组DNA技术的基本工具
DNA双螺旋的直径只有2nm,对如此微小的分子进行操作,是一项非常精细的工作,更需要专门的“分子工具”。
一、限制性内切核酸酶——“分子手术刀”
限制性内切核酸酶:切割DNA分子的工具,简称限制酶
1.来源:
2.种类:
主要从原核生物中分离纯化出来
迄今分离的限制酶有数千种
(限制酶不是一种酶,而是一类酶)
流感嗜血杆菌的d菌株( Haemophilus influenzae d )中先后分离到3种限制酶,则分别命名为:____________________________。
HindⅠ、HindⅡ、 HindⅢ
资料卡-限制酶的命名:用生物属名的头一个字母与种加词的头两个字母,组成了3个字母的略语,以此来表示这个酶是从哪种生物中分离出来的。例如,一种限制酶是从大肠杆菌( Escherichia coli)的R型菌株分离来的,就用字母EcoR表示;如果它是从大肠杆菌R型菌株中分离出来的第一种限制酶,则进一步表示成EcoRI。
练习:粘质沙雷氏杆菌(Serratia marcesens)中分离的第一种限制酶即_______;
SmaⅠ
一、限制性内切核酸酶——“分子手术刀”
3.作用:
识别双链DNA分子的特定核苷酸序列,并且使每一条链中特定部位的磷酸二酯键断开。
“两个特定”
5'
3'
5'
3'
T
A
G
G
T
A
T
C
C
A
磷酸二酯键
一、限制性内切核酸酶——“分子手术刀”
识别序列:
大多数限制酶的识别序列由6个核苷酸组成;
也有少数限制酶的识别序列由4个、8个或其他数量的核苷酸组成。
特点1:都可以找到一条中(心)轴线;
特点2:中轴线两侧的双链DNA上的碱基是反向对称重复排列的 ,称为回文序列。
正向读与另一条链反向读的碱基顺序完全一致
3.作用:
一、限制性内切核酸酶——“分子手术刀”
4.切割结果
实例1——EcoR Ⅰ限制酶
识别特定序列为GAATTC;
切割特定部位为G、A之间的磷酸二酯键
当限制酶在它识别序列的中轴线两侧将DNA分子的两条链分别切开时,产生的是黏性末端。
黏性末端
黏性末端
黏性末端:
…TTAA
一、限制性内切核酸酶——“分子手术刀”
实例2——Sma Ⅰ限制酶
识别特定序列为CCCGGG;
切割特定部位为C、G之间的磷酸二酯键
当限制酶在它识别序列的中轴线处将DNA分子的两条链分别切开时,产生的是平末端。
平末端 平末端
4.切割结果
一、限制性内切核酸酶——“分子手术刀”
现学现用:写出下列限制酶切割形成的黏性末端
BamHⅠ________ EcoRⅠ________ HindⅢ________ BglⅡ ________
GATC
AATT
AGCT
GATC
*思考:你从中发现什么现象了?
不同的限制酶可能切割形成相同的黏性末端。
一、限制性内切核酸酶——“分子手术刀”
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