内容正文:
第3章 基因的本质
第1节 DNA是主要的遗传物质
一.格里菲思的肺炎链球菌体内转化实验
1.通过确凿的实验证据向遗传物质是蛋白质的观点提出挑战的,首先是艾弗里
2.肺炎双球菌类型及特点
类型
菌体
菌落
毒性
S型细菌
有多糖类的荚膜
表面光滑
有
R型细菌
没有多糖类的荚膜
表面粗糙
无
3.荚膜是某些细菌的细胞壁外面包围的一层胶状物质,无荚膜的肺炎链球菌,感染人体或动物体后,容易被吞噬细胞吞噬并杀灭,有荚膜的肺炎链球菌,可抵抗吞噬细胞的吞噬,有利于细菌在宿主体内生活并繁殖。
4.格里菲思体内转化实验
(1)实验过程及现象
注射
实验现象
①R型活细菌
小鼠不死亡
②S型活细菌
小鼠死亡,分离出S型活细菌
③加热致死的S型细菌
小鼠不死亡
④R型活细菌+加热致死的S型细菌
小鼠死亡,分离出S型活细菌
(2)加热致死的原理:蛋白质和核酸对高温的耐受力是不同的。在80~100℃的温度范围内,蛋白质失活, DNA双链解开,当温度恢复至室温后,DNA双链能够重新恢复,但蛋白质的活性无法恢复。
(3)实验①②对比说明,R型细菌无致病性,S型细菌有致病性。
实验②③对比说明加热致死的S型细菌无致病性。
实验②③④对比,说明R型细菌能转化为S型细菌。
(4)结论:加热致死的S型细菌中含有某种“ 转化因子”,能将R型活细菌转化为S型活细菌。
二.艾弗里的肺炎链球菌体外转化实验
1.实验过程及结果
第一组
S型细菌的细胞提取物
分别与R型细菌混合培养
出现了S型活细菌
第二组
S型细菌的细胞提取物+蛋白酶
出现了S型活细菌
第三组
S型细菌的细胞提取物+RNA酶
出现了S型活细菌
第四组
S型细菌的细胞提取物+酯酶
出现了S型活细菌
第五组
S型细菌的细胞提取物+DNA酶
只长R型活细菌
2.结论:DNA才是使R型细菌产生稳定遗传变化的物质。
3.减法原理:在对照实验中,与常态比较,人为去除某种影响因素称为“减法原理”。如,在艾弗里的肺炎链球菌体外转化实验中,每个实验组特异性地去除了一种物质,从而鉴定出DNA是使R型细菌产生稳定遗传变化的物质
4.格里菲思和艾弗里的这两种转化实验中的转化效率都很低,因此真正转化为S型细菌的数量很少,在小鼠体内或培养基上,还是以R型细菌为主。
三.赫尔希和蔡斯T2噬菌体侵染细菌的实验(方法:放射性同位素标记法)
1.实验材料:T2噬菌体和大肠杆菌。(T2噬菌体是一种专门寄生在大肠杆菌体内的病毒)
(1)T2噬菌体的模式图
(2)T2噬菌体的增殖
①吸附:利用尾部末端吸附在大肠杆菌表面
②注入:T2噬菌体将DNA注入大肠杆菌细胞中,蛋白质外壳则留在大肠杆菌细胞的外表面
③合成:在大肠杆菌体内,T2噬菌体在自身的DNA的作用下,利用大肠杆菌体内的物质合成自身的DNA和蛋白质
④组装:新合成的DNA和蛋白质外壳,组装出很多个与亲代相同的子代噬菌体
⑤释放:子代噬菌体由于大肠杆菌的裂解而被释放出去,再去侵染其他的大肠杆菌
总结:噬菌体增殖需要的条件:只有模板来自T2噬菌体的DNA,其余(原料,场所,能量等)均来自大肠杆菌
2. 实验设计思路:在T2噬菌体的化学组成中,S是蛋白质的特征元素,P是DNA的特征元素,用不同的放射性同位素,32P和35S分别标记DNA和蛋白质,直接地、单独地观察它们的作用
3. 实验过程(实验分为两组,相互对照)
(1).标记大肠杆菌 (2).标记噬菌体
含35S的培养基+大肠杆菌→含 35S 的大肠杆菌 含35S的大肠杆菌+噬菌体→含 35S 的噬菌体
含32P的培养基+大肠杆菌→含 32P 的大肠杆菌 含32P的大肠杆菌+噬菌体→含 32P 的噬菌体
(3).用(2)得到的标记的噬菌体侵染未标记的大肠杆菌,保温一段时间后 搅拌、离心
保温的时间要求:全部噬菌体侵染细菌且未释放。
搅拌的目的:使吸附在细菌上的 噬菌体 与 细菌 分离。
离心的目的:让离心管的上清液中析出重量较轻的 T2噬菌体颗粒 ,沉淀物中留下 被感染的大肠杆菌。
(4)放射性检测
组别
放射性高低
原因分析
35S标记蛋白
质外壳组
上清液
高
沉淀物
低
搅拌不充分,含35S的噬菌体外壳仍吸附在细菌表面,随细菌离心到沉淀物中
32P标记DNA
分子组
上清液
低
原因1:保温时间过短,部分亲代噬菌体未完成侵染
原因2:保温时间过长,部分被感染的大肠杆菌裂解释放出子代噬菌体
沉淀物
高
(5)实验结果:细菌裂解释放出的子噬菌体中, 能 (能/不能)检测到32