项目十二紫外一可见分光光度法（课件）《《分析化学基础（供药学类专业用第2版）》定性与定量分析方法同步教学（中国医药科技出版社第二版）

定性分析与定量分析的基础 定性分析基础 物质对光的选择吸收 A B A  在一定的实验条件下，物质对光的吸收与物质的浓度成正比。 A  C 增大 定量分析基础 定性与定量分析方法 1 （一）对比吸收光谱的一致性 丹参注射液紫外光谱 比较样品化合物的吸收光谱特征与标准化合物的吸收光谱特征；或与文献所载的化合物的标准谱图进行核对。 结论：同一物质有相同吸收光谱图，反之不一定是同一物质。 一、定性分析的方法（对比法） （二）对比吸收光谱特征数据 在不同化合物的吸收光谱中，最大吸收波长可以相同，但因摩尔质量不同，它们的吸光系数有明显差异，因此在比较 的同时，再比较（ ）或（ ）则可加以区分。 例如 甲基麻黄碱和去甲基麻黄碱均为251nm、257nm、264nm，但可从二者的摩尔吸光系数加以区别。 甲基麻黄碱 251nm（lgε2.20），257nm（lgε2.27），264nm（lgε2.19） 去甲基麻黄碱 251nm（lgε2.11），257nm（lgε2.11），264nm（lgε2.20） （三） 对比吸光度（或吸光系数）的比值 不同的最大吸收波长处的吸光度（与标准品在相同条件下测定）的比值是用于鉴别化合物的特性。 如维生素B12的吸收光谱有三个吸收峰， 分别为278nm、36lnm、550nm。2015年版 《中国药典》规定，作为鉴别的依据，361nm 与278nm吸光度的比值应为1.70～1.88；361nm 与550nm的吸光度比值应为3.15～3.45。 361nm 550nm 278nm 二、定量分析的方法 （一） 单组分样品的定量方法 1. 标准曲线法（适用大批量样品） ①配制一系列不同浓度的标准溶液，选择 合适的参比溶液，在相同条件下，以待测组分 的最大吸收波长λmax作为入射光，分别测定各 标准溶液对应的吸光度。 ②以浓度c为横坐标、吸光度A为纵坐标 描绘曲线，称为标准曲线，也叫工作曲线。 ③按照相同的实验条件和操作程序，用待测溶液配制未知试样溶液并测定其吸光度A样，在标准曲线上找到与之对应的未知试样溶液的浓度c样 。 标准曲线 2. 标准对照法 与标准品的已知浓度比较（浓度尽可能接近） 因是同种物质，故 K标＝K样；因吸收池厚度相同，即L标=L样。所以： 需要指出的是c样为稀释溶液浓度，若求原样品溶液中组分的浓度，应乘以稀释倍数。即：c原样＝c样×稀释倍数。 　　如果样品的称量及稀释度与标准品完全一致，则 ： 例题1：维生素B12原料的含量测定：精密称取原料样品30mg，加水溶解并稀释至1升，摇匀，得每毫升样品30μg，另精密称取维生素B12对照品30mg，加水溶解并稀释至1升，其浓度为30μg/ml，在361nm波长处分别测的吸光值为： A样=0.481和A标=0.512，试计算维生素B12的含量。 解： = × = =93.95% 与标准品的吸光系数比较 在没有标准品的情况下，可从有关手册或文献上查得标准物质的吸光系数。然后采用与标准物质相同的溶剂，配制样品溶液，在相同波长下测定样品的吸光度A值，求出样品的吸光系数，按下式计算含量： 例题2：取维生素B12样品30mg，用蒸馏水配成1000ml的溶液，于1cm的吸收池中，在361nm波长处分别测的吸光度A为0.607，求样品中维生素B12的含量。（已知维生素B12 的=207） 解： c= （ ）样202.3 =97.7% 解线性方程法 对于如图所示的两组分混合物 混合组分吸收光谱相互重叠的三种情况 ∵ ∴ （二）多组分样品的定量方法 ≠ 等吸收双波长消除法 在试样中含有两个待测组 分a和b时，若要测定组分b， 组分a有干扰，应设法消除组 分a的吸收干扰。首先选择待 测组分b的最大吸收波长λ2作 为测量等吸收双波长消除法示意图波长，然后用作图的方法选择参比波长λ1，使组分a在这两个波长处的吸光度相等。