项目十二紫外一可见分光光度法（课件）《《分析化学基础（供药学类专业用第2版）》紫外-可见分光光度法原理同步教学（中国医药科技出版社第二版）

第二节 紫外-可见分光光度法的基本原理 透光率（T） I0＝Ia + It + Ir I0＝Ia + It T = ×100% （0~100%） 光吸收示意图 吸光度（A） 对透光率的倒数取对数，称为吸光度即： 透射光的强度 It与入射光的强度I0的比值称为透光率 透光率愈大，溶液对光的吸收愈少 一、光的吸收定律 1760年，Lambert从实验中找到了A与液层厚度的关系式： A = k1l 当入射光波长、溶剂和吸光物质种类、浓度和溶液的温度都一定时，该溶液的吸光度只与液层厚度成正比 1852年，Beer从实验中找到了A与溶液浓度的关系式： A = k2 c 当入射光波长、溶剂和吸光物质种类、液层厚度和溶液的温度都一定时，该溶液的吸光度只与溶液浓度成正比 一、光的吸收定律 朗伯-比尔（ Lambert-Beer ）定律 当一束平行单色光垂直通过某一具有一定光照面积的、含吸光物质的稀溶液时，若该溶液均匀、无散射，则在入射光波长、强度及溶液的温度等条件保持不变的情况下，该溶液中的吸光物质对单色光的吸光度A与溶液的浓度c及溶液液层厚度L的乘积成正比关系。 Lambert-Beer定律是分光光度法定量分析的理论依据。 摩尔吸光系数 在入射光波长一定时，溶液浓度为1mol/L ，液层厚度为1cm时所测得的吸光度称为摩尔吸光系数，常用ε表示 。 百分吸光系数 在入射光波长一定时，溶液浓度为1%（W/V） （g/100ml）、液层厚度为1cm时所测得的吸光度称为百分吸光系数，常用 表示。 二者的关系： 吸光系数K 吸光系数 吸光系数代表单位条件下某吸光物质的吸光度。因而在给定的条件下它是一个物理常数，表明物质对某一特征波长光的吸收能力。 吸光系数越大，表明该物质的吸光能力越强，测定的灵敏度越高，故吸光系数是定性和定量的重要依据。 吸光度具有加和性：A（a+b+c）=Aa+Ab+Ac Cd2+浓度为1400µg·L-1，双硫腙法显色测定波长为520nm，液层厚度2cm，吸光度为0.22，求ε、和T。一份金属镉2.145g，用盐酸全部溶解后制成1升溶液，再取1ml稀释成25000ml，用厚度为1cm的比色皿，相同的方法测得溶液吸光度为0.56，计算该金属镉的百分含量。(已知MCd=112.40 1g=1000mg 1mg=1000µg 10-0.22=0.6)（各3分） 解： 二、偏离Beer定律的因素 化学因素: （1）溶液的浓度(稀溶液) （2）物质的化学变化（结构稳定） （3）溶剂的影响 光学因素: （1）非单色光 （2）非平行光 （3）散射光 （4）反射光 仪器因素： 解决：低浓度、稳定 解决：仪器、参比溶液 解决：仪器、环境 第三节 显色反应及测定条件选择 一、显色反应 在光度分析法中将被测组份转变为有色化合物的反应，称为显色反应。 显色反应: X ＋ R XR 被测物 显色剂 一、显色反应 显色剂和显色反应的要求 被测物质与所生成的有色物质之间，必须有确定的定量关系。 反应产物必须有足够的稳定性。 显色剂在测定波长处无明显吸收。 反应产物的摩尔吸收系数足够大（104），以保证灵敏度。