内容正文:
1.说出蛋白质工程崛起的缘由,概述蛋白质工程的基本原理。
2.举例说明依据人类需要对原有蛋白质结构进行基因改造、生产目标蛋白的过程。
学习目标
第三节 蛋白质工程
1
目
录
/课堂小结与随堂训练/
2
[教材知识梳理]
(一)蛋白质工程是基因工程的延伸
1.蛋白质工程的一般过程
(1)蛋白质工程的概念:是指以蛋白质分子的_________及其与__________的关系为基础,对__________________进行有目的的设计改造,以改造现有蛋白质或制造新的蛋白质。
结构规律
生物功能
编码该蛋白的基因
(2)蛋白质工程的一般过程示意图
(3)基因工程的不足
①原则上只能生产自然界中已经______的蛋白质。
②生产的蛋白质不一定符合人们生产和生活的______。
存在
需要
充分
再设计和改造
不存在
提高
2.蛋白质工程首先要获取基因和蛋白质的结构数据
蛋白质工程首先需要获得和分析____________的相关信息,包括基因及蛋白质的结构数据。GenBank是目前全球最为著名的生物大分子数据库。
目标蛋白质
3.通过基因改造生产目标蛋白质
(1)基因的体外定向突变
①适用对象:掌握了基本__________的蛋白质。
②类型
目的 方法
大面积的定向突变 _____________
单一或少数几个突变位点的基因定向突变 ________________
基因全合成
引物定点引入法
结构信息
③定点诱变法的过程示意图
(2)非定点诱变技术
适用对象 不能预先确定_________的蛋白质
缺点 目的性和_______不够强
优点 由于突变位点_____,有时会产生意想不到的改造效果
诱变位点
针对性
多
(二)蛋白质工程的设计思路与应用
1.设计思路:对于已知_________的蛋白质,可以采用_________
技术,通过改变其结构便可有目的地改造蛋白质的功能。例如,将人胰岛素B链第28位的脯氨酸残基、第29位的赖氨酸残基分别改为赖氨酸残基和脯氨酸残基,便可获得单体速效胰岛素,这样便能避免胰岛素分子形成聚合体,以保证其效能的及时发挥。
空间结构
定点诱变
2.应用
目的 思路 实例
提高蛋白质
(酶)的_______ 在蛋白质分子中引入二硫键 向T4溶菌酶引入二硫键能提高T4溶菌酶的热稳定性
转换氨基酸残基 酵母菌的丙糖磷酸异构酶的两个亚基中各含有两个天冬酰胺残基,分别用苏氨酸和异亮氨酸残基替代,大幅度提高了酶的热稳定性
稳定性
改善酶的
_________ 转换氨基酸残基、删除末端部分氨基酸序列或某些肽段等 将嗜热芽孢杆菌酪氨酰—tRNA合成酶分子中的一个苏氨酸残基改变为丙氨酸或脯氨酸残基时,酶的活性大幅提高
消除酶的
__________ 转换氨基酸残基 将枯草芽孢杆菌蛋白酶分子中第222位的甲硫氨酸残基转换成半胱氨酸残基或丙氨酸残基,酶的活性将不再受漂白剂的抑制
续表
催化活性
被抑制特性
[微提醒]
通过对基因的操作来实现对天然蛋白质的改造优势
(1)任何一种天然蛋白质都是由基因编码的,改造了基因即对蛋白质进行了改造,而且改造过的蛋白质可能会遗传下去。
(2)对基因进行改造比对蛋白质直接改造要容易操作,难度要小得多。
[核心要点点拨]
蛋白质工程与基因工程的比较
项目 蛋白质工程 基因工程
区别 起点 预期新蛋白质功能 获取目的基因
过程 预期新蛋白质的功能→设计蛋白质结构→设计对应的氨基酸序列→改造或合成相关DNA序列→合成出新蛋白质 获取目的基因→构建基因表达载体→将目的基因导入受体细胞→目的基因及其表达产物的检测鉴定
项目 蛋白质工程 基因工程
区别 实质 通过改造相应的基因达到对蛋白质进行改造的目的 基因重组
结果 可以创造出自然界中不存在的蛋白质 生产自然界已存在的蛋白质
应用及现状 ①主要集中在对现有蛋白质进行改造,如胰岛素、T4溶菌酶和丙糖磷酸异构酶等;②对创造新的蛋白质还有许多技术难题未突破,因为蛋白质高级结构非常复杂,人们对此知之甚少 ①已被广泛应用,如转基因植物、动物、药品生产等已商业化;②基因治疗仅处于初期的临床试验阶段
续表
联系 ①蛋白质工程获得目的基因后,需要通过基因工程技术合成新的蛋白质,因此基因工程是蛋白质工程的关键技术;
②蛋白质工程是在基因工程的基础上,延伸出来的第二代基因工程
续表
[典例] (2023·常州高二期末)已知生物体内有一种蛋白质(P),该蛋白质是一种转运蛋白,由305个氨基酸组成。如果将P分子中158位的丝氨酸变成亮氨酸,240位的谷氨酰胺变成苯丙氨酸,改变后的蛋白质(P1)不但保留P的功能,而且具有了酶的催化活性。回答下列问题:
(1)从上述资料可知,若要改变蛋白质的功能,可以考虑对蛋白质的__