第2节 第2课时 微生物分离、纯化和培养的无菌技术(课件PPT)-【新课程学案】新教材2023-2024学年高中生物选择性必修3 生物技术与工程(苏教版2019)

1.概述平板划线法。 2.通过平板划线法获得纯化的酵母菌菌落。 3.明确稀释涂布平板法及其应用。 4.进行土壤中分解尿素的细菌的分离并计数。 学习目标 第二节 第2课时 微生物分离、纯化和培养的无菌技术 1 2 目 录 3 知识点(一)　平板划线法分离和 纯化微生物 /课堂小结与随堂训练/ 知识点(二) 稀释涂布平板法分离和 纯化微生物 2 [教材知识梳理] (一)平板划线法 1．概念：把含有多种微生物的杂菌样品，通过在特定的_______ _________________，从而获得单个菌落的方法。 2．具体做法：将微生物样品在琼脂平板表面多次做“由点到线”的稀释划线，经过这样的操作可得到较多独立分布的单个微生物。 知识点(一)　平板划线法分离和纯化微生物 琼脂 平板表面划线稀释 3．操作步骤 4．纯化：如果不能确定这种菌落是否由单个细胞繁殖而来，还可以反复多次进行平板划线，以确保获得纯种。 (二)通过平板划线法获得纯化的酵母菌菌落 1．实验原理 (1)_________________ 培养基能满足酵母菌生长、繁殖的营养需要。 (2)___________是实验室中进行微生物分离和纯化的常用方法之一。 2．实验目的：尝试通过平板划线法获得纯化的酵母菌菌落。 马铃薯葡萄糖琼脂 平板划线法 3．实验步骤 4．注意事项 (1)整个过程要确保无菌操作，防止杂菌污染。 (2)接种环灼烧的目的 ①第一次划线前：杀死接种环上的微生物，避免杂菌污染培养物。 ②每次划线前：杀死残留菌种，保证每次划线菌种均来自上次划线末端。 ③划线结束后：杀死残留菌种，避免污染环境和感染操作者。 (3)接种环灼烧之后接种，要冷却后再进行操作，以免温度太高杀死菌种。 (4)划线时最后一区域不要与第一区域相连。 (5)划线用力要大小适当，防止用力过大划破培养基。 [微提醒] 倒平板易错提醒 (1)待培养基冷却到50 ℃左右时进行倒平板操作。 (2)要使锥形瓶的瓶口通过酒精灯火焰进行灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。 (3)倒平板时，要用拇指和食指将培养皿打开一条稍大于锥形瓶瓶口的缝隙，不要完全打开，以免杂菌污染培养基。 (4)整个操作过程要在酒精灯火焰旁进行，避免杂菌污染。 (5)平板冷却凝固后，要将平板倒置。因为平板凝固后，皿盖上会凝结水珠，将平板倒置，既可以防止皿盖上的水珠落入培养基，又可避免培养基中的水分过快蒸发。　　 [典例]　(2023·启东高二期末)下图为实验室培养和纯化大肠杆菌过程中的部分操作步骤，下列有关说法错误的是 (　 ) A．①②③步骤操作时需要在酒精灯火焰旁进行 B．步骤①中待倒入的培养基冷却后盖上培养皿的皿盖 C．步骤③中，每次划线前后都需对接种环进行火焰灼烧灭菌处理 D．步骤④划线接种结束后，将平板倒置后放入培养箱中培养 [答案]　B [解析]　由图可知，①是倒平板，②是用接种环蘸取菌液，③是进行平板划线，④是培养。①②③步骤操作时需要在酒精灯火焰旁进行，防止被杂菌污染，A正确；倒完平板后应立即盖上培养皿的皿盖，冷却后将平板倒过来放置，B错误；步骤③中，每次划线前后都需对接种环进行火焰灼烧灭菌处理，C正确；划线接种结束后，将平板倒置后放入培养箱中培养，可以避免培养基中的水分过快地挥发和防止皿盖上的水珠落入培养基造成污染，D正确。 [层级训练评价] (一)澄清概念 1．判断下列叙述的正误 (1)如果不能确定某菌落是否由单个细胞繁殖而来，可通过反复多次进行平板划线进行培养分离纯化。 ( ) (2)在平板3个区域划线时，要按照顺序不间断进行划线快速完成。( ) (3)经灭菌的培养基冷却到50 ℃左右进行倒平板并立即将平板倒置备用。 ( ) (4)倒平板后需间歇晃动，以保证表面平整。 ( ) √ × × × (二)落实知能 2．平板划线法是微生物培养时，接种微生物的常用方法。下列有关叙述错误的是 (　 ) A．平板划线法可用来分离菌种 B．常用涂布器进行平板划线 C．应在酒精灯火焰周围进行平板划线 D．划线后的平板应倒置培养 答案：B　 解析：平板划线法可以获得单菌落，因而可用来分离菌种，A正确；平板划线的工具是接种环，B错误；为了避免杂菌污染，应在酒精灯火焰周围进行平板划线，C正确；为防止冷凝水滴入培养基，同时也为减少培养基水分的蒸发，划线后的平板应倒置培养，D正确。 答案：B　 解析：接种环在每次划线前后均需灼烧，图中显示有三个划线区，所以接种环需要经过4次灼烧灭菌，A正确；划线分离法只能用于菌种的分离，而无法对微生物进行计数，B错误；微生物培养过程应该进行无菌操作，配制的培养基要进行高压蒸汽灭菌，可以将一个未接种的平板倒置培养作为对照以检测培养基灭