内容正文:
第2节 动物细胞工程 一 动物细胞培养
1.动物细胞工程常用的技术手段有?其中基础的技术手段是?
2.什么叫动物细胞培养?3.动物细胞培养需要满足哪些条件?
4.动物细胞培养过程中为什么要定期更换培养液?阅读课本43-50
5.多数细胞培养过程的温度和PH的具体要求范围是?
6.动物细胞培养时要把细胞置于什么样的混合气体中培养?O2、CO2各起什么作用?
7.复述动物细胞培养的过程,动物细胞培养的原理?8.为什么分化程度低的细胞更容易培养?
9.怎样制备动物细胞悬液?10.原代培养指?传代培养指?11.悬浮生长?贴壁生长?
12.什么叫接触抑制?13.无论悬浮生长还是贴壁生长,都要进行传代培养,为什么?
14.什么叫干细胞?它主要存在于哪些组织和器官?15.干细胞的类型有哪些?
16.胚胎干细胞是?胚胎干细胞特点?17.成体干细胞是?成体干细胞有什么特点?
18.什么叫诱导多能干细胞?它有什么特点?有什么优点?
第2节 动物细胞工程 二 动物细胞融合技术与单克隆抗体
1.动物细胞融合?2.动物细胞融合的原理?3.诱导动物细胞融合的方法有?4.动物细胞融合技术意义?5.“灭活病毒”中灭活的含义?6.灭活病毒诱导细胞融合的原理?
7.复述单克隆抗体的制备过程8.B淋巴细胞、癌细胞有何特点(优点和局限性)?
9.杂交瘤细胞特点?10.在制备单抗的过程中,给小鼠注射特定抗原的目的是?
11.第一次筛选的目的是为什么获得什么细胞?淘汰掉哪些细胞?如何筛选?
12.第二次筛选的目的是为什么获得什么细胞?如何筛选?出现什么结果的细胞为所需的细胞?13.单克隆抗体制备过程用到的生物学原理有哪些?
14.单克隆抗体的制备过程用到的技术有哪两个?15.单克隆抗体有什么优点?
16.单克隆抗体被广泛用作诊断试剂的原因是?17.单克隆抗体有哪些方面的应用?三 动物体细胞核移植技术与克隆动物1.什么叫动物体细胞核移植技术?
2.动物体细胞核移植技术分为哪些类型?原理?3.复述动物体细胞核移植的过程。
4.克隆动物是对体细胞供体动物进行的100%的复制吗?为什么?
5.克隆动物用到了哪些技术手段?6.体细胞核移植有什么重要的应用?
第二章 细胞工程
第2节 动物细胞工程
一 动物细胞培养
二 动物细胞融合技术与单克隆抗体
三动物体细胞核移植技术与克隆动物
一 动物细胞培养
1.条件
从动物体中取出相关的组织,将它分散成单个细胞,然后在适宜的培养条件下,让这些细胞生长和增殖的技术。
原理?
糖类、氨基酸
无机盐、维生素
… …
无菌、无毒的环境
温度、pH和渗透压
适宜的气体环境
+
合成培养基
血清
一般使用液体培养基,也称培养液。
1.培养微生物的基本营养成分?特殊营养和PH需求?
2.培养植物的培养基?
MS固体培养基;蔗糖、植物激素
培养液,培养用具,培养环境无菌操作;
定期更换培养液;
温度:(36.5±0.5)℃ pH7.2-7.4
95%空气和5%CO2的CO2培养箱
培养皿或松盖培养瓶;
营养
条件
?
一 动物细胞培养
2.过程
用机械法 或用胰蛋白酶、胶原蛋白酶等处理
取动物组织
分散成单个细胞
接触抑制
悬浮生长
贴壁生长
(大多数)
解决方法
传代培养
分瓶
培养
细胞悬液
加培养液
原代培养
在培养皿或培养瓶内
细胞密度过大、有害代谢物积累、营养物质缺乏等
细胞分裂受阻
悬浮培养的细胞:直接用离心法收集
贴壁细胞:用胰蛋白酶处理分散成单个细胞,用离心法收集
②制成细胞悬液,分瓶培养
①收集细胞
胚胎或幼龄动物的组织或器官 分化程度低,增殖能力强,易培养
细胞贴壁
正常细胞能否一直传代培养下去?
一 动物细胞培养
3.干细胞培养及应用
干细胞:动物和人体内保留的少数具有分裂和分化能力的细胞。
种类 胚胎干细胞 成体干细胞 诱导多能干细胞
来源 __________ 骨髓、脐带血和外周血 体细胞(如成纤维细胞)
特点 能分化为成年动物体内的任何一种类型的细胞,并进一步形成机体所有的组织和器官甚至______ 分化成特定的细胞或组织;不具有发育成完整个体的能力 能诱导分化成类似
的细胞
早期胚胎
个体
胚胎干细胞
应用 分化成心肌细胞、神经元和造血干细胞等 造血干细胞用于治疗白血病;神经干细胞用于治疗帕金森病、阿尔茨海默病;精原干细胞 治疗小鼠的镰状细胞贫血、阿尔茨海默病、心血管疾病等
如:
胚胎干细胞还可如何获得?
ES细胞有何的局限?
IPS优点?
无须破坏胚胎;
避免免疫排斥
移植
取成纤维细胞等
iPS细胞
转入相关因子
细胞发生转化
分化
胰岛细胞
神经元
血细胞
肠上皮细胞
心肌细胞
肝细胞
病人
iPS细胞用于治疗人类疾病