1.2 微生物的培养技术及应用（第2课时）（课件）-【帮课堂】2023-2024学年高二生物同步学与练（人教版2019选择性必修3）

第1章 发酵工程 1.2 微生物的培养技术及应用 第2课时 微生物的选择培养和计数 1 2 阐明微生物选择培养的原理 进行土壤中分解尿素的细菌的分离和计数 学习目标 目 生物学 高中 问题探讨 聚合酶链式反应（PCR）是一种在体外扩增DNA片段的技术，此项技术要求使用耐高温的DNA聚合酶。1973年，科学家从美国黄石国家公园的热泉中筛选出水生栖热菌，进而提取出耐高温的DNA聚合酶。这种酶目前已被广泛用于聚合酶链式反应（PCR）。 思考：为什么水生栖热菌能从热泉中筛选出来呢？ 这是因为水生栖热菌能在70-80℃的高温条件下生存，而绝大多数微生物在此条件下不能生存。 启示：寻找目的菌种时要根据它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。 一、选择培养基 实验室筛选微生物原理： 人为提供 的条件（包括_____、_____和_____等），同时 。 有利于目的菌生长 抑制或阻止其他微生物的生长 营养 温度 pH 方法：利用选择培养基分离 选择培养基：在微生物学中，允许特别种类的微生物生长，同时 抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。 思考·讨论： 怎样选择出抗氨苄青霉素能力的细菌? 一、选择培养基 培养基中加氨苄青霉素 具有抗氨苄青霉素能力的菌落 长出各种各样的细菌 基础培养基+氨苄青霉素 没有抗氨苄青霉素能力的菌落被淘汰 怎样选择出抗氨苄青霉素能力的细菌? 基础培养基 怎么证明一个选择培养基具有选择性呢？ 应设置基础培养基（如牛肉膏蛋白胨培养基）作为对照，若基础培养基中生长的菌落数多于该选择培养基，则说明该选择培养基具有选择性。 选择培养基配方的设计 尿素［CO(NH2)2］含氮量高，化学性质稳定，是现代农业生产中一种重要的氮肥。尿素施入土壤后，会被土壤中的某些细菌分解成NH3，再被转化为NO3-、NH4+等被植物吸收。而这些细菌之所以能分解尿素，是因为它们能合成脲酶，脲酶催化尿素分解产生NH3，NH3可以作为细菌生长的氮源。 讨论： 1.如果让你配制一种培养基，将土壤稀释液中能分解尿素的细菌分离出来，培养 基的配方该如何设计？ 设计一种选择培养基，以尿素作为唯一氮源。 (细菌生长的氮源) 尿素 NH3 脲酶 尿素分解菌 尿素 2.该培养基与普通培养基有哪些共同点和不同点？ 除以尿素作为唯一氮源外，该培养基的其他营养成分与普通培养基基本相同。 二、微生物的选择培养 1g土壤中有多少能分解尿素的细菌？ 分离：获得分解尿素的细菌的纯培养物 计数：测定分解尿素的细菌的数量 用平板划线法接种培养结果的图片如下。请结合图片分析，平板划线法能否达到对细菌进行计数的目的？为什么？ 　不能，平板划线法最开始的划线很可能菌类会长成一片，导致无法计数，此外灼烧接种环的时候也会杀死一部分菌类。 二、微生物的选择培养 稀释涂布平板法 1×10 1 mL 1 mL 1 mL 1 mL 1 mL 1 mL 1×102 1×103 1×104 1×105 1×106 1×107 9 mL 无菌水 90mL无菌水 10g 将10 g土样加入盛有90mL无菌水的锥形瓶中，充分摇匀，制成菌液。取1mL上清液加入盛有9mL无菌水的试管中，依次等比稀释。 系列稀释 二、微生物的选择培养 稀释涂布平板法 微量 移液器 涂布平板 ③取0.1mL菌液，滴加到培养基表面。 ④将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中。 ⑤将涂布器放在火焰上灼烧，待酒精燃尽、涂布器冷却后，再进行涂布。 ⑥用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表 面。涂布时可转动培养皿，使涂布均匀。 二、微生物的选择培养 稀释涂布平板法 培养 待涂布的菌液被培养基吸收后，将平板倒置（同时放一个未接种的培养基），放入30~37℃的恒温培养箱中培养1~2d。 恒温培养箱 稀释103倍 稀释104倍 稀释105倍 空白对照 二、微生物的选择培养 二、微生物的选择培养 比较 平板划线法 稀释涂布平板法 工具 接种环 涂布器 操作 接种环在固体培养基表面连续划线 系列梯度稀释操作和涂布平板操作 特点 方法简单，但不适宜计数 单菌落更易分开，可以计数，但操作复杂，需涂布多个平板 结果 共同点 常用微生物分离方法比较 都能将微生物分散到固体培养基表面，以获得单细胞菌落，达到分离纯化微生物的目的，也可用于观察菌落特征 三、微生物的数量测定 ② 计数原则： 缺点： 统计的_________往往比______的实际数目少 ① 原理： 【原因：当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。】 方法1：稀