学习情境41 细菌总数的测定（课件）-《水环境监测》同步教学（化学工业出版社）

细菌总数的测定 ——平皿计数法 一 预备知识 菌落总数测定是测定水中需氧菌、兼性厌氧菌和异养菌密度的方法。因为细菌能以单独个体、成双成对、链状、成簇等形式存在，而且没有任何单独一种培养基能满足一个水样中所有细菌的生理要求。所以，由此法所得的菌落可能要低于真正存在的活细菌的总数。 菌落总数是指水样在营养琼脂上有氧条件下37℃培养48h后，所得1ml水样所含菌落的总数。此法主要作为判定饮用水、水源水等污染程度的标志。 二 实训准备 准备事宜 名 称 方 法 样品的采集和保存   水样采集在经灭菌的玻璃瓶内，要尽快分析，一般不宜超过2h，否则应4℃保存，可保存12h。 实训试剂 水 蒸馏水或纯水。 营养琼脂 成分：蛋白胨10g，牛肉膏3g，氯化钠5g，琼脂10~20g，蒸馏水1000ml。 制法：将上述成分混合后，加热溶解，调整pH为7.4~7.6，分装于玻璃容器中（如用含杂质较多的琼脂时，应先过滤），经103.43kPa（121℃，151b）灭菌20min，储存于暗处备用。 三 分析步骤 生活生活饮用水 水源水 以无菌操作方法用灭菌吸管吸取两份1ml充分混匀的水样（平行接种）   以无菌操作方法吸取1ml充分混匀的水样，注入盛有9ml灭菌生理盐水的试管中，混匀成1︰10稀释液 注入灭菌平皿中 吸取1︰10稀释液1ml注入盛有9ml灭菌生理盐水的试管中，混匀成1︰100稀释液，按同法依次稀释成，1︰1000，1︰10000稀释液等备用 倾注约15ml已融化并冷却到45℃左右的营养琼脂培养基 用灭菌吸管吸取未稀释水样和2~3个适宜稀释度的水样1ml，分别注入灭菌平皿内（每个稀释度应做一平行接种） 三 分析步骤 立即旋摇平皿，使水样与培养基充分混匀 水样接种的同时，另用一个平皿只倾注营养琼脂培养基 空白对照 待冷却凝固后，翻转平皿，使底面向上 置于36℃±1℃培养箱内培养48h 菌落计数（可用眼睛直接观察，可用菌落计数器或放大镜检查） 三 分析步骤 记下各平皿菌落数，求同稀释度的平均菌落数 按各种不同情况计算和报告计数结果 求同稀释度的平均数时，若其中一个平皿有较大片状菌落生长时，不宜采用，应以无片状菌落生长的平皿作为该稀释度的平均菌落数。若片状菌落不到平皿的一半，其余一半中菌落数分布很均匀，则可将此半皿计数后乘2以代表全皿菌落数。然后再求该稀释度的平均菌落数 ①首先选择平均菌落数在30~300之间者进行计算，若只有一个稀释度的平均菌落数符合此范围，将该菌落数乘以稀释倍数报告之（见表1实例1）。 ②若有两个稀释度，其生长的菌落数均在30~300之间，则视二者之比值决定。比值小于2报告两者的平均数（如表1实例2），若比值大于或等于2报告其中稀释度较小的菌落数（见表1实例3和4）。 ③若所有稀释度的平均菌落数均大于300，按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之（见表1实例5）。 ④若所有稀释度的平均菌落数均小于30，按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之（见表1实例6）。 ⑤若所有稀释度的平均菌落数不在30~300之间，以最接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告之（见表1实例7）。 ⑥若所有稀释度的平板上均无菌落生长，以未检出报告之。 ⑦若所有平板上都菌落密布，不要用“多不可计”报告，在稀释度最大的平板上，任意数其中2个平板1cm2中的菌落数，除2求每平方厘米内平均菌落数，乘以皿底面积63.61cm2，再乘其稀释倍数作报告。 ⑧菌落计数的报告：菌落数在100以内时按实有数报告，大于100时，采用两位有效数字，在两位有效数字后面的数值，以四舍五入方法计算，也可用10的指数来表示（见表1“报告方式”栏）。 三 分析步骤 三 分析步骤 实例 不同稀释度的平均菌落数 两个稀释度菌落数之比 菌落总数/（CFU/ml） 报告方式/（CFU/ml） 10-1 10-2 10-3 1 1365 164 20 - 16400 16000或1.6×104 2 2760 295 46 1.6 37750 38000或3.8×104 3 2890 271 60 2.2 27100 27000或2.7×104 4 150 30 8 2 1500 1500或1.5×103 5 多不 可计 1650 513 - 513000 510000或5.1×105 6 27 11 5 - 270 270或2.7×102 7 多不 可计 305 12 - 30500 31000或3.1×104 表1 稀释度选择及菌落总数报告方式 四 菌落总数分析原始数据记录表 样品编号 不同稀释度的菌落数 两个稀释度菌落数之比 菌落总数 （CFU/ml） 100 10-1 10-2 10-3   1