项目十二紫外一可见分光光度法（课件）《《分析化学基础（供药学类专业用第2版）》紫外-可见分光光度法的应用同步教学（中国医药科技出版社第二版）

紫外-可见分光光度法的应用 一、定性分析 1.未知化合物的定性鉴定 未知化合物的定性鉴定鉴定的方法有两种 （1）与标准物、标准谱图对照：将样品和标准物以同一溶剂配制相同浓度溶液，并在同一条件下测定，比较光谱是否一致。 （2）吸收波长和摩尔吸收系数：由于不同的化合物，如果具有相同的发色基团，也可能具有相同的紫外吸收波长，但是它们的摩尔吸收系数是有差别的。如果样品和标准物的吸收波长相同，摩尔吸收系数也相同，可以认为样品和标准物是同一物质。 紫外－可见分光光度法可以进行化合物某些基因的判别、 共轭体系及构型、构象的判断。 (1) 某些特征集团的判别 有机物的不少基团(生色团)，如羰基、苯环、硝基、共轭体系等，都有其特征的 紫外或可见吸收带，紫外－可见分光光度法在判别这些基团时，有时是十分有用的。如在270～300nm处有弱的吸收带，且随溶剂极性增大而发生蓝移，就是羰基n－π*跃迁所产生R吸收带的有力证据。在184nm附近有强吸收带(E1带)，在204nm附近有中强吸收带(E2带)，在260nm附近有弱吸收带且有精细结构(B带)，是苯环的特征吸收，等等。可以从有关资料中查找某些基团的特征吸收带。 2.有机化合物的结构推断 (2)共轭体系的判断 共轭体系会产生很强的K吸收带，通过绘制吸收光谱，可以判断化合物是否存在共轭体系或共轭的程度。如果一化合物在210nm以上无强吸收带，可以认为该化合物不存在共轭体系；若在215～250nm区域有强吸收带，则该化合物可能有两至三个双键的共轭体系，如1－3丁二烯， 为217nm， 为21,000；若260～350nm区域有很强的吸收带，则可能有三至五个双键的共轭体系，如癸五烯有五个共轭双键， 为335nm， 为118,000。 (3) 区分化合物的构型 包括顺反异构及互变异构两种情况的判断。 顺反异构体的判断 生色团和助色团处在同一平面上时，才产生最大的共轭效应。由于反式异构体的空间位阻效应小，分子的平面性能较好，共轭效应强。因此，及都大于顺式异构体。例如，肉桂酸的顺、反式的吸收如下： ＝280nm =13500 =295nm =7000 反式的最大吸收波长和摩尔吸收系数都大于顺式 (4)互变异构体的判断 某些有机化合物在溶液中可能有两种以上的互变异构体处于动态平衡中，这种异构体的互变过程常伴随有双键的移动及共轭体系的变化，因此也产生吸收光谱的变化。最常见的是某些含氧化合物的酮式与烯醇式异构体之间的互变。例如乙酰乙酸乙酯就是和烯醇式两种互变异构体： 酮式：λmax=204 nm   烯醇式：λmax=243 nm 它们的吸收特性不同：酮式异构体在近紫外光区的 为204nm( 为16)，是n－π*跃迁所产生R吸收带。 烯醇式异构体的 为243nm( 为16000)， 是π－π*跃迁出共轭体系的K吸收带。 如果有机化合物在紫外可见光区没有明显的吸收峰，而杂质在紫外区有较强的吸收，则可利用紫外光谱检验化合物的纯度。 3.化合物的纯度检验 例如要鉴定甲醇和乙醇中的杂质苯，可利用苯在256nm处的B吸收带，而甲醇或乙醇在此波长几乎没有吸收。又如四氯化碳中有无二硫化碳杂质，只要观察在318nm处有无二硫化碳的吸收峰即可。 二、定量分析 紫外－可见分光光度法定量分析的方法常见到的有如下几种 ： 1.单组分的定量分析 如果在一个试样中只要测定一种组分，且在选定的测量波长下，试样中其它组分对该组分不干扰，这种单组分的定量分析较简单。一般有吸光系数法（绝对法）、标准对照法（比较法）和标准曲线法 。 已知维生素B12的α(361nm) = 20.7L×g-1×cm-1。精密称取样品30.0mg，加水溶解后稀释至1000ml，在波长361nm处用1.00cm吸收池测得样品的吸光度为0.618，计算样品溶液中维生素B12的质量分数。 吸光系数法（绝对法） 解：所测样品溶液中维生素B12的质量浓度                                                   其质量分数                                                                                                                                                                             C 安络血的相对摩尔质量为236，将其配成100 mL含安络血 0.4300 mg的溶液，盛于1 cm吸收池中，在λmax＝355 nm处测得