内容正文:
第2节
微生物的基本培养技术及应用
微生物的选择培养和计数
第2课时
选择培养基
Selective medium
01
微生物的数量测定
Determination of the number of microorganisms
03
习题巩固
Exercises to consolidate
04
微生物的选择培养
Selective culture of microorganisms
02
CONTENS
目录
PART ONE
选择培养基
简|约|水|彩|通|用|模|板
稀释涂布平板法呈现的杂菌群
该怎么办呢?
选择培养基应运而生。
自然界中微生物数量繁多,种类庞杂,要想从中分离出需要的特定微生物并不容易,尤其当要分离的微生物在混合菌群中不是优势种群时,仅通过一般的平板划线法或稀释涂布平板法很难实现。
聚合酶链式反应(PCR)是一种在体外扩增DNA片段的技术,此项技术要求使用耐高温的DNA聚合酶。
寻找耐高温的DNA聚合酶
1973年,布鲁克在美国黄石国家公园的一个热泉中发现了耐热的水生栖热菌,并从这种菌种提取出耐高温的DNA聚合酶。
讨论:1.筛选水生栖热菌的思路是什么样的?
耐高温的酶
耐高温生物体
高温环境(热泉、火山口)
寻找
寻找
2.为什么水生栖热菌能从热泉中筛选出来呢?
筛选原因:水生栖热菌能在70-80℃高温条件下生存,
而绝大多数微生物在此条件下不能生存。
寻找目的菌种时要根据它对生存环境的要求,到相应的环境中去寻找。
筛选原则
耐寒微生物
耐热微生物
石油分解菌
实验室中微生物的筛选原理:
人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH等),同时抑制或阻止其他微生物生长。
温泉
冰川
油田
利用这种原理制作的培养基就是选择培养基
在微生物学中,将允许特定种类的微生物生长,同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。
概念
分离酵母菌、霉菌等真菌(青霉素能杀死细菌、放线菌)
分离固氮微生物
分离自养型微生物
④加高浓度食盐
金黄色葡萄球菌
⑤石油是唯一碳源
能消除石油污染的微生物
③不加含碳有机物
②不加氮源
①加入青霉素
种类
分离并计数某种微生物的数量(例如,能分解尿素的细菌)。
作用
+氨苄青霉素
具有抗氨苄青霉素能力的菌落
没有氨苄青霉素抗性的细菌
选择培养基
培养基+氨苄青霉素
培养基
没有抗氨苄青霉素能力的菌落被淘汰
怎样选择出抗氨苄青霉素能力的细菌?
怎么证明一个选择培养基具有选择性呢?
应该设置基础培养基(如牛肉膏蛋白胨培养基)或完全培养基作为对照,若基础培养基或完全培养基中生长的菌落数菌多于该选择培养基,则该选择培养基具有选择性。
基础培养基
选择培养基
那么如果让你分离土壤中分解尿素的细菌,你应该怎么设计呢?
尿素[CO(NH2)2]含氮量高,化学性质稳定,是一种重要的农业氮肥,尿素不能直接被农作物吸收,土壤中的细菌将尿素分解成NH3,再被转化为NO3-、NH4+等被植物吸收 。
细菌利用尿素的原因
土壤中的细菌分解尿素是因为他们能合成脲酶。
CO(NH2)2 + H2O 2NH3 + CO2
脲酶
1.如果让你配制一种培养基,将土壤稀释液中能分解尿素的细菌分离出来,培养基的配方该如何设计?
设计一种选择培养基,用尿素作为唯一氮源,可以将分解尿素的细菌分离出来。
2.该培养基与普通培养基有哪些共同点和不同点?
这种培养基与普通培养基相比,只是用尿素作为唯一氮源,培养基的其他营养成分基本相同。
现学现用
牛肉膏 5.0g
蛋白胨 10.0g
NaCl 5.0g
琼脂 20.0g
蒸馏水 定容到1000ml
培养基一
KH2PO4 1.4g
NaH2PO4 2.1g
MgSO4·7H2O 0.2g
葡萄糖 10.0g
尿素CO(NH2)2 1.0g
琼脂 15.0g
蒸馏水 定容到1000ml
培养基二
2.从用途上来讲,培养基二属于 培养基,目的是为了获得 。
3.两种培养基共有的培养基成分有:
。
培养基一的碳源为 ,氮源为 ;
培养基二的碳源为 ,氮源为 。
1.从物理性质来讲,两者属于_____培养基,判断依据是______________________,