内容正文:
生物技术与工程
发酵工程
基因工程
重组DNA技术的基本工具
传统发酵技术的应用
选择性必修3《生物技术与工程》
细胞工程
生物技术的安全性与伦理问题
微生物的培养技术及应用
动物细胞工程
植物细胞工程
基因工程的基本操作程序
基因工程的运用
蛋白质工程的原理和应用
转基因产品的安全性
发酵工程及其应用
胚胎工程
关注生殖性克隆人、禁止生物武器
第1章 发酵工程
Chapter 1 fermentation engineering
第1章 发酵工程
第2节 微生物的培养技术及应用
(第四课时)
目标
01
02
03
通过对土壤中分解尿素的细菌进行分离和计数,理解并掌握微生物计数的方法。(科学探究)
通过实例,理解各类微生物都能适应其生活环境。(生命观念)
根据微生物的代谢类型,配制选择培养基,总结分离微生物的过程和测定微生物数量的常用方法。(科学思维)
学习目标
4
主要方法 稀释涂布平板法 平板划线法
主要步骤
接种工具
菌体获取
能否用于计数
共同点
系列梯度稀释操作和涂布平板操作
接种环在固体培养基表面连续划线
涂布器
接种环
从适宜稀释度的平板上的菌落中挑取菌体
在具有显著的菌落特征的区域挑取菌体
可以计数,但是操作复杂,需涂布多个平板
不能计数
使培养基上形成由单个细菌细胞繁殖而来的子细胞群体——菌落
温故知新:稀释涂布平板法和平板划线法的比较
问题1:怎么通过稀释涂布平板法统计活菌的数目呢?还有哪些统计活菌的方法呢?
目录
CONTENTS
微生物的选择培养
2/
选择培养基
1/
微生物的数量测定
3/
探究实验:土壤中分解尿素细菌的分离与计数
4/
03
微生物的数量测定
稀释涂布平板法进行计数的原理是什么?为什么可以用于细菌的计数?
2
3
4
1
合作探究一:请同学们自主阅读教材P18,小组合作完成以下问题。
稀释涂布平板法进行计数有什么注意事项?
通过稀释涂布平板法统计的细菌的数目与它的实际数目相同吗 ?
用显微镜进行直接计数方法统计的细菌的数目与它的实的际数目相同吗?
一、微生物的数量测定
8
一、微生物的数量测定
(一)统计菌体数目:
1
2
显微镜直接计数法
稀释涂布平板计数法
血细胞/细菌计数板
——间接计数法
——直接计数法
稀释103倍
稀释104倍
稀释105倍
空白对照
一、微生物的数量测定
(一)统计菌体数目:
1
稀释涂布平板计数法
——间接计数法
(1)原理:
当样品的稀释度足够 时,培养基表面生长的一个 ,来源于 中的一个 。通过计数平板上的 数,就能推测出样品中大约含有多少 。
高
菌落
样品稀释液
菌落
活菌
样品的稀释度将直接影响平板上的菌落数目
1
稀释涂布平板计数法
——间接计数法
(2)计数原则:
选择菌落数为30~300
的平板计数。
同一稀释度下,应至少对3个平板进行重复计数,然后求出平均值
统计的菌落往往比活菌的实际数目低
统计的结果一般用菌落数而不是活菌数。
恰当的稀释度、涂布是否均匀是成功统计菌落数目的关键。
一、微生物的数量测定
(一)统计菌体数目:
1
稀释涂布平板计数法
(3)计算公式:
M代表稀释倍数
C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数
V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL)
每g样品中的菌落数=
(C÷V)×M
一、微生物的数量测定
(一)统计菌体数目:
——间接计数法
实战训练
1.某同学在均使用0.1mL菌液,稀释倍数为105的培养基中测得3个平板上菌落数为80、90、100,那么每g样品中菌落数是( )
A. 900 B. 9.0×107
C. 90 D. 9.0×106
实战训练
2.请计算4号试管的结果表明每克土壤中的活菌数约为 个。
1.1×108
2
显微镜直接计数法
——直接计数法
(1)原理:
利用细菌计数板或血细胞计数板,在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量。
血细胞计数板
常用于相对较大的酵母菌细胞、霉菌孢子等的计数。
细菌计数板
对细菌等较小的细胞进行观察和计数。
一、微生物的数量测定
(一)统计菌体数目:
2
显微镜直接计数法
(3)优缺点:
①优点:
②优点:
快速、直观
A.不能区分死菌和活菌→偏大
B.不适于对运动细菌的计数。