内容正文:
第二章 基因工程
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基因工程
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基因决定性状(一)
青霉菌能产生对人类有用的抗生素——青霉素
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基因工程
第一节 基因工程概况
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基因决定性状(二)
豆科植物的根瘤能够固定空气中的氮
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基因决定性状(三)
家蚕能够吐出蚕丝为人类利用
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定向基因改造设想
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设想一
能否让禾本科的植物也能够固定空气中的氮?
能否让细菌“吐出”蚕丝?
设想二
能否让微生物产生出人的胰岛素、干扰素等珍贵的药物?
设想三
经过多年的努力,科学家于20世纪70年代创立了可以定向改造生物的新技术——基因工程。
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发现限制性内切酶的科学家阿尔伯
发现连接酶的科学家
科恩伯格、奥乔亚
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美国生物化学家、现代基因工程的创始人P·伯格
首次实现两种不同生物的DNA体外连接,获得了第一批重组DNA分子,这标志着基因工程技术的诞生。
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首次实现重组的dna分子在受体细胞表达
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基因工程
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一、基因工程的含义
按照人们的愿望,进行严密的设计,通过体外DNA重组和转基因等技术,有目的地改造生物种性,使现有的物种在较短的时间内趋于完善,创造出更符合人们需求的新的生物类型,或者利用这种技术对人类疾病进行基因治疗,这就是基因工程。
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二、基因工程研究的理论依据
不同基因具有相同的物质基础
基因是可切割的
基因是可转移的
多肽与基因之间存在对应关系
遗传密码是通用的
基因可以通过复制将遗传信息传递给下一代
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三、基因工程过程操作的基本路线
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①
②
③
④
⑤
⑥
①从细胞中分离出DNA
②限制酶截取DNA片断
③分离大肠杆菌中的质粒
④ DNA重组
⑤用重组质粒转化大肠杆菌
⑥培养大肠杆菌克隆大量基因
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四、基因工程操作的工具
将目的基因片断从人体细胞内提取,
需要基因的剪刀——限制性内切酶。
将目的基因与运载体DNA连接,
需要基因的针线——DNA连接酶。
将目的基因运入大肠杆菌,
需要基因的运输工具——运载体。
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1、限制性内切酶
分布:主要在微生物中。
特点:特异性,即识别特定核苷酸序列, 切割特定切点。
结果:产生黏性未端(碱基互补配对)。
举例:大肠杆菌的一种限制酶能识别GAATTC序列,并在G和A之间切开。
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一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列,并在特定的切割点上将DNA 分子切断。目前已发现的限制酶有200多种。
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命名:HindIII由Haemophilus influenzae Rd中属名的H,种名的in 和菌株代号的d组成, III表示从此菌株中提取的第三种限制性内切核酸酶。
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限制性内切酶作用过程
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几种限制性内切酶
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2、DNA连接酶
连接酶的作用:将互补配对的两个黏性末端连接起来,使之成为一个完整的DNA分子。
连接的部位:磷酸二酯键,不是氢键。
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问题
用DNA连接酶连接两个相同的黏性未端要连接几个磷酸二酯键?
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DNA连接酶的作用过程
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DNA连接酶的作用过程
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DNA连接酶的作用原理
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3、运载体
作用:将外源基因送入受体细胞。
条件:
能在宿主细胞内复制并稳定地保存。
具有多个限制酶切点。
具有某些标记基因
种类:质粒、噬菌体和动植物病毒。
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要让一个从甲生物细胞内取出来的基因在乙生物体内进行表达,首先得将这个基因送到乙生物的细胞内去。能将外源基因送入细胞的工具就是运载体。
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质粒的特点
细胞染色体外能自主复制的小型环状DNA分子;
质粒是基因工程中最常用的运载体;
最常用的质粒是大肠杆菌的质粒;
存在于许多细菌及酵母菌等生物中;
质粒的存在对宿主细胞无影响;
质粒的复制只能在宿主细胞内完成。
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问题
要想将某个特定基因与质粒相连,需要几种限制性内切酶和几种DNA连接酶处理?
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常用的质粒(用于原核生物)
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质粒载体pBR332:研究最多,最常用的一种载体。
4363bp
复制起点+1个抗氨苄青霉素基因+1个抗四环素基因