第21章 高效液相色谱法（课件）- 《分析化学》同步教学（复旦大学版）

分析化学 第21章 高效液相色谱法 High-Performance Liquid Chromatography，HPLC 70年代迅速发展 不挥发有机物约占70% 80年代以来HPLC 文献量 21%（89年） 仪器销售量 25%（12 亿）（89年） 应用领域 拓展（化工、环保、临床、药品、生命） 超过 GC 第21章 高效液相色谱 法 High-Performance Liquid Chromatography，HPLC 21－1 高效液相仪 21－2 固定相和流动相 21－3 色谱峰扩展及其影响因素 21－4 高效液相色谱法和主要分离类型 21－5 超临界流色谱 第21章 高效液相色谱 法 High-Performance Liquid Chromatography，HPLC 1 高效液相色仪 2 固定相和流动相 3 高效液相色谱法和主要分离类型 4 超临界流体色谱 第21章 高效液相色谱 法 21-1 高效液相色谱仪 1、仪器结构 单柱塞泵结构示意图 第21章 高效液相色谱 法 21-1 高效液相色谱仪 1、仪器结构 HPLC与GC比较 a. 柱 长:10—50cm 内径:2—5mm 微柱 ◎填充柱 微 HPLC 柱 0.5~1.0 m m 毛细管 HPLC 柱 100~500 μm 纳级 HPLC 柱 10~100 μm ◎拉制 HPLC 柱 50~200μm ◎开管 HPLC 柱 5~10μm 第21章 高效液相色谱 法 21-1 高效液相色谱仪 2、掌握要点 微柱的优越性： 1、消耗少（样、流动相、固定相） 2、灵敏（溶质在柱上稀释比下降） 3、分离效率高（可装长柱） 4、操作条件易选择 5、其它分离联用易 第21章 高效液相色谱 法 21-1 高效液相色谱仪 2、掌握要点 b、检测系统 常用UV光度检测（包括它的现代方法） 引人注目：荧光检测 选择性 10-9~10-11 g/ml 质谱检测 通用性 10-8 g/ml 蛋白质分析 生物质谱 第21章 高效液相色谱 法 21-1 高效液相色谱仪 2、掌握要点 C、梯度林洗装置 作用： 让流动相的组成随时间而改变，以调节流动相的极性、离子强度或pH，使样品组分的相对保留值得以改变，从而提高分离效率。 与GC的程序升温技术比较 第21章 高效液相色谱 法 21-1 高效液相色谱仪 2、掌握要点 1、固定相分类 材料的刚性 ( 刚性固体、硬质凝胶） 固相填料的疏松（薄壳型微珠载体，全多孔型载体） 形状（球形、无定形） 2、流动相 选择溶剂要求 第21章 高效液相色谱 法 21－2 固定相和流动相 1 分配色谱（LLC） 2 吸附色谱 （LSC） 3 键合相