第九章 紫外一可见分光光度法（课件）《分析化学基础》第二课时同步教学（人卫版供医学检验技术专业用第3版）

影响吸收带的因素 1.位阻影响 顺式二苯乙烯 max ＝ 280nm (10500) 反式二苯乙烯 max ＝ 295.5nm (29000) 1 二苯乙烯顺反异构体的紫外吸收光谱 2 2.跨环效应 3 3. 溶剂效应 4. pH的影响 4 What is UV-Vis spectrophotometry? Basic principles of UV-Vis? How UV-Vis is applied in quantitative analysis? 5 分光光度法的基本定律 ——朗伯-比尔定律 6 朗伯-比尔定律 描述物质对单色光的吸收(absorbance, A)与它的浓度(concentration)和厚度(thickness)间关系的定律。 A 7 Lambert-Beer Law Lambert’s Law (A vs. thickness) Beer’s Law (A vs. concentration) 8 A＝ ECl 浓度 厚度 吸光系数 吸光度 吸光系数(absorptivity, E) 吸光物质在单位浓度及单位厚度时的吸光度 9 1. 摩尔吸光系数：是指在一定波长时，溶液浓度为1mol/L，厚度为1cm的吸光度，用表示。 2. 百分吸光系数：是指在一定波长时，溶液浓度为1％(W/V)，厚度为1cm的吸光度，用 表示。 10 (单组分)样品的定量方法 (一) 吸光系数法 (二) 标准曲线法 (三) 对照法 11 (一)吸光系数法 A= ECl 12 例 维生素B12的水溶液在361nm处的 值是207，盛于1cm吸收池中，测得溶液的吸光度为0.414，则溶液浓度为： C = = = 0.002(g/100ml) A El 0.414 207×1 13  A 200 240 280 320 360 400 440nm (二) 标准曲线法 max 14 Cx Ax A 0 Concentration 要 求 1. r > 0.999 2. n = 5-7 3.待测浓度尽量在标准曲线中间位置 标准曲线 (A=aC+b,r) 15 (三)对照法 待测样品 (Unknown sample) 标准样品 (Reference sample) 16 要求-标准溶液的浓度应尽量接近样品浓度 = A标 A样 C标 C样 C样= C标· A样 A标 17 (多组分)样品的定量方法 18 同单组分定量法 Cb=(A-Aa)/Eb 计算分光光度法 19 计算分光光度法 计算分光光度法是运用数学、统计学与计算机科学的方法，通过试验设计与数据的变换和解析，对物质进行定性定量的方法，属于化学计量学(Chemometrics)的范畴。 20 计算分光光度法 数学变换法 导数光谱法 正交函数法 褶合光谱法 …… 数值计算法 图解法 双波长法 系数倍率法 三波长法 …… 信号处理法-卡尔曼滤波法 主成分分析法 矩阵解法 偏最小二乘法 …… 21 (一) 数值计算法 1、解线性方程组法 22 2、双波长法 a(待测) b(干扰) M(混合) 2 1 A 23 3、系数倍率法 KAy2=Ay1 则 KA2=K(Ax2 +Ay2) A1=Ax1+Ay1 A =KA2A1=K(Ax2+Ay2)(Ax1+Ay1) =KAx2Ax1＝(KEx2Ex1)·Cx=KCx 24 4、偏最小二乘法 （Partial Least Squares Method，PLS） 偏最小二乘法充分考虑混合物校正矩阵Y和浓度矩阵C的相互关系，在分解Y的同时将C也进行正交分解，然后将T*对R*作线性回归，继而可进一步求出待测体系的浓度值。具有计算误差小、准确度高、运算速度快等优点。 Y=USVt=U*S*Vt* +EY=T*Vt*+EY C=PGQt=P*G*Qt*+EC=R*Qt*+EC 25 5、卡尔曼滤波法 （Kalman Filtering Method，KF） 卡尔曼滤波法是通讯与现代控制论中的一种有效方法。其基本思想为有效地利