19平面色谱法（课件）- 《分析化学》同步教学（吉林大学版）

第19章 平面色谱法 上一内容 下一内容 回主目录 返回 50-2 一、平面色谱法的分类： 薄层色谱法（TLC）：将固定相于惰性硬质板上涂成一薄层，在此薄层上进行色谱分离的方法。 其原理同柱层析。 纸色谱法：属分配色谱法，固定相为吸附于滤纸上的水分，流动相一般为不与水混溶的有机溶剂。 薄层电泳法：带电荷的被分离物质（如蛋白、核苷酸、多肽、糖类等）在惰性的支持介质（如纸、醋酸纤维素、琼脂糖凝胶等）上，以不同泳动速度向相反电极方向移动而分离。 19.1 平面色谱法的分类和原理 上一内容 下一内容 回主目录 返回 50-3 二、平面色谱法参数 1、定性参数 比移值（retardation foctor） Rf = L / L0 可用范围：0.2～0.8 最佳范围：0.3～0.5 上一内容 下一内容 回主目录 返回 50-4 相对比移值(relative Rf )： Rr＝Rf（i）/Rf（s）＝Li /Ls 重现性和可比性较 Rf 好 上一内容 下一内容 回主目录 返回 50-5 2、相平衡参数— K 和k 与Rf 的关系 Rf ＝ 1/(1+ k)＝1/(1 + KVs/Vm) k , K＝0，Rf ＝1 k , K＝∞，Rf ＝0 3、面效参数— n和H 理论塔板数n：n ＝ 16 ( L/W ) 2 塔板高度 H： H ＝ L0/n Rf 与R’类似 上一内容 下一内容 回主目录 返回 50-6 4、分离参数 分离度(resolution，R): 两相邻斑点中心距离与两斑点平均宽度的比值。 R = 2(L2－L1) /(W1 + W2) =2d /(W1 + W2) 在平面色谱中，R 应大于1 上一内容 下一内容 回主目录 返回 50-7 分离数（seperation number，SN）： 定义：在相邻斑点分离度为1.177时，在Rf 为0和1.0之间能完全分离的组分斑点数。 SN越大，平面的容量越大，一般薄层板的SN 在10 左右，高效薄层板可达20。 计算SN: (W1/2)0、(W1/2)1分别为由薄层色谱扫描所得的Rf＝0和Rf＝1的组分的半峰宽 上一内容 下一内容 回主目录 返回 50-8 上一内容 下一内容 回主目录 返回 50-9 薄层色谱法的主要类型 吸附薄层色谱法：s－固体吸附剂 分配薄层色谱法：s－吸留在载体表面的固定液和吸水达17% 以上的硅胶。 经典薄层色谱法 现代薄层色谱法 19.2 薄层色谱法 上一内容 下一内容 回主目录 返回 50-10 modern TLC 上一内容 下一内容 回主目录 返回 50-11 薄层色谱法的一般流程 上一内容 下一内容 回主目录 返回 50-12 分离能力强，斑点集中； 灵敏度高，几十ng～几μg即可检出； 速度快，几至几十min，一次可展开多个试样； 试样处理简单，对被分离物质性质没有限制； 上样量比较大，可以点状或条状点样； 仪器简单，操作方便，可保留彩色图谱。 应用广泛，尤其对药物的鉴别，《中华人民共和国药典》2010版中许多药物采用此法。 薄层色谱法的特点 上一内容 下一内容 回主目录 返回 50-13 吸附剂，adsorbent 1. 硅胶 2. 氧化铝 3. 聚酰胺 一、薄层色谱的固定相 上一内容 下一内容 回主目录 返回 50-14 1. 硅胶（SiO2·H2O，silica gel） 结构：内部— 硅氧交联结构→多孔结构 表面— 硅醇基→氢键作用→吸附活性中心 适用范围：硅胶具有微酸性，适于分析酸性或中性物质 上一内容 下一内容 回主目录 返回 50-15 基本特性： 易形成氢键：与极性物质或不饱和化合物。物质极性↑，吸附能力↑，不易洗脱。 吸附活性次序：活泼型>束缚型>游离型 吸附活性等级：与含水量有关，含水高，活性级数高，吸附能力弱。 活化与失活：吸水→失活→105～110OC烘干30-60min(可逆失水)→吸附力最大→500OC烘干(不可逆失水)→活性丧失，无吸附力。 上一内容 下一内容 回主目录 返回 50-16 上一内容 下一内容 回主目录 返回 50-17 2. 氧化铝 由氢氧化铝在400～500℃灼烧而成 种类 特性 使用范围 碱性 氧化铝 混有碳酸钠等成分而具碱性，pH约为9~10 适合中性或碱性化合物的分离。尤其适合分离生物碱等碱性成分 中性 氧化铝 除去碱性成分水洗至中性而得，pH约为7~7.5 适合于对酸碱性不稳定的化合物 酸性 氧化铝 用稀硝酸或稀盐酸处理而成，p