3.1重组DNA技术的基本工具课件-2022-2023学年高二下学期生物人教版（2019）选择性必修3

国际基因工程机器大赛 问题探讨 国际基因工程机器大赛 （International Genetically Engineered Machine competition, iGEM） 尝试着创造出一个有趣的基因工程产品吧。 你愿意接受挑战吗？ 问题探讨 水母 （发出绿色荧光） 绿色荧光蛋白基因 水稻的细胞 （含绿色荧光蛋白基因） 大米 （不能发出绿色荧光） 绿色荧光大米 提取（剪切） 植物组 织培养 导入 如何获得发光的大米？ 第3章第1节 基因工程 重组DNA技术的工具 问题探讨 T C C T A G A A T T C T C G G ``` ``` T A T G A A T T C C A T A C A G G A T C T T A A G A G C C ``` ``` A T A C T T A A G G T A T G Gene: 绿色荧光蛋白基因 目的基因 限制性内切核酸酶—“分子手术刀” 限制性内切核酸酶—“分子手术刀” 来源： 种类： 主要来自原核生物 特点： 数千种 能识别双链DNA分子的特定核苷酸序列，并使每一条链中特定部位的磷酸二酯键断开。 （限制酶不是一种酶，而是一类酶） 1.你能推测限制酶存在于原核生物中的作用是什么吗？ 破坏外源DNA，保护自我 2.为什么限制酶不剪切细菌本身的DNA？ 缺乏特定的核苷酸序列 限制性内切核酸酶—“分子手术刀” 限制性内切核酸酶—“分子手术刀” 1’ 2’ 3’ 4’ 5’ G 限制酶 1’ 2’ 3’ 4’ 5’ A 磷酸二酯键 T G C C G T A A 5' 3' 5' 3' 限制性内切核酸酶—“分子手术刀” 作用部位： 识别序列长度： 结 果： 特定切点上的磷酸二酯键 大多数是6个核苷酸序列 产生黏性末端或平末端 5' 3' 5' 3' T A G G T A T C C A 磷酸二酯键 限制性内切核酸酶—“分子手术刀” 仔细观察以下四种限制酶识别的特定序列有何特点？ EcoRⅠ ……G-A-A-T-T-C…… ……C-T-T-A-A-G…… HindⅢ ……A-A-G-C-T-T…… ……T-T-C-G-A-A…… BamHⅠ ……G-G-A-T-C-C…… ……C-C-T-A-G-G…… TaqⅠ ………T-C-G-A……… ………A-G-C-T……… 限制酶所识别的序列的特点是：呈现碱基互补对称，无论是6个碱基还是4个碱基，都可以找到一条中心轴线，中轴线两侧的双链DNA上的碱基是反向对称重复排列的 ，称为回文序列。 中轴线 限制性内切核酸酶—“分子手术刀” A G T C A T T C G A T A G G A T C A T C A T A T 大肠杆菌(E.coli)的EcoRⅠ限制酶能特异性识别 _________序列，并切割___和___之间的____________。 切割后产生__________。 GAATTC G A 磷酸二酯键 黏性末端 限制酶 EcoRI 限制酶 限制性内切核酸酶—“分子手术刀” 被限制酶切开的DNA两条单链的切口，带有几个伸出的核苷酸，他们之间正好互补配对，这样的切口叫黏性末端。 黏性末端 限制性内切核酸酶—“分子手术刀” C C C G G G G G G C C C G G G C C C C C C G G G SmaI 限制酶只能识别 序列，切割 和 之 间的 切开，切割后产生 。 CCCGGG C G 磷酸二酯键 平末端 限制酶 SmaI 限制酶 平末端 限制性内切核酸酶—“分子手术刀” 当限制酶从识别序列的中心轴线处切开时，切开的DNA两条单链的切口，是平整的，这样的切口叫平末端。 平末端 1.要想从一个DNA分子中获得某个特定的基因需要有几个酶切位点？ 产生几个末端？ 2 4 CT TCATG AATTCCCTAA GAAGTACTTAA GGGAT T GGCATCTTAA AAT TCCGTAG GGCATCTTAA AATTCCGTAG CTTCATG AATTCCCTAA GAAGTACTTAA GGGATT CTTCATG AATTCCCTAA GAAGTACTTAA