6.3.2 牛的胚胎移植（课件）- 《畜禽繁殖与改良技术（第2版）》同步教学（西南交大版）

6.3.2 牛的胚胎移植 畜禽繁殖与改良 1 /Contents 目录 一、供体和受体母牛的准备 二、胚胎收集 三、胚胎检查 四、胚胎的移植——非手术法移植 2 诱导发情 牛胚胎移植技术路线示意图 供体和受体母牛的准备 1 4 一、供体和受体母牛的准备 （1）供体母牛 供体应是良种，而且为性状表现优秀、具有较高育种价值与遗传优势的个体； 供体应健康无病，膘情中等偏上，年龄以青壮年为佳； 供体生殖机能应处在较高水平。既无难产、流产等繁殖病史，也无子宫卵巢疾病，超排处理前应有两个或两个以上的正常情期。牛、猪产后两个月以上才能作为供体。 一、供体和受体母牛的准备 （2）受体母牛 一般选用价格低廉、生产性能比较低的同种母牛，达到配种年龄和体型；要具有良好的健康状态，体型与膘情中上等，初产或经产青壮年母牛。检疫和疫苗接种与供体相同；应具有良好的繁殖性能，既无难产、流产等繁殖病史，也无子宫卵巢疾病，移植胚胎前应有两个或两个以上的正常情期，也不能与公畜同群。供体与受体的发情时间应该相同，前后差异不超过1d。必要是时对供、受体进行同期发情处理。 2、供体的超数排卵处理与人工授精 （1）根据母牛自然发情周期进行超排 所用激素：FSH、PG 牛超排方法： 时间 第1天 第5天 第6天 第7天 第8天 第9天 第10天 早上7时 放栓 雌二醇2mg 孕酮100mg FSH 4ml FSH 3ml FSH 4ml PG4mg FSH 1ml 发情 人工授精 晚上7时 FSH 4ml FSH 3ml FSH 2ml撤栓 FSH 1ml 人工授精 发情后8－12小时配种，间隔12小时再配种一次。 一、供体和受体母牛的准备 （2）利用阴道栓人工控制卵泡波进行超排 一、供体和受体母牛的准备 PGF2a或氯前列烯醇 时间：早于供体牛1d 方法：间隔约12天，两次注射。 一、供体和受体母牛的准备 3、受体牛的同情发情 （1）前列腺素处理法 方法：耳部埋植，9—12天取管。 （2）孕激素处理法 胚胎收集 2 10 冲胚液有很多种，目前最常用的为含5%犊牛血清的杜氏磷酸盐缓冲液（D-PBS），也可用于体外短期保存胚胎。 保存时间长或体外培养多用M-199液。 二、胚胎收集 （1）冲胚液和保存液的制作 ①采卵时间 非手术法冲卵 二、胚胎收集 ②常规采卵法 牛的非手术收集胚胎可利用三路式导管冲卵器。外管前端连接以气囊，当将冲卵器插入子宫内时，充气使气囊胀大，堵住子宫颈内口以免冲洗液经子宫颈流出。将冲洗液通过内管注入子宫角内，然后由另一导管导出冲洗液。 每侧子宫角需冲洗100-150ml。冲洗液的导出应顺畅，并尽可能回收全部注入的容量。 二、胚胎收集 母牛非手术冲卵示意图 PBS 集卵杯 子宫颈 子宫角 卵巢 二、胚胎收集 牛的非手术法回收胚胎 二、胚胎收集 a.冲卵液 b.硬膜外麻醉 c.插入子宫中的Foley管 d.子宫颈 母牛非手术冲卵示意图 二、胚胎收集 二、胚胎收集 冲卵管通过子宫颈后，充气把输卵管拉紧，固定在宫体和子宫颈内。子宫充满液体后回收，按摩子宫角前端，两角同时回收，反复5~6次。 ③子宫体冲卵法 向子宫内注射抗菌素或前列腺素 ④供体母牛采卵后的处理 胚胎检查 3 18 收集到的冲冼液，需静置10min，使胚胎下沉到容器底部，然后移去上清液，再放于解剖镜下检查胚胎的数量和发育情况，再将发育正常的胚胎收集到注射器或移植管内供移植用。 三、胚胎检查 沉降法 胚胎过滤杯法 检卵 6、胚胎评定 形态完整,轮廓清晰,呈球形,分裂球大小均匀,透明带适中； 轮廓清晰,色调和细胞密度良好； 轮廓不清楚,色调发暗,结构较松散,游离的细胞和液胞较多； 轮廓模糊,色调暗,结构松散,碎片细胞和液泡很多。 三、胚胎检查 A级 B级 C级 D级 发育正常的胚胎 三、胚胎检查 牛的异常胚胎示意图 三、胚胎检查 三、胚胎检查 胚胎品质的衡量图 三、胚胎检查 牛排卵8d内胚胎发育情况及存在部位 胚胎的移植——非手术法移植 4 25 重点应检查子宫和卵巢的异常情况以及子宫的紧张性，然后检查卵巢上黄体的发育情况（位置、大小），只有黄体发育良好者才能正式列为待移植母牛，并记录和在牛臀部标出黄体位于左右哪一侧。 牛站立保定于六柱栏保定架内，用2%盐酸利多卡因或普鲁卡因进行荐尾椎硬膜外麻醉，用18号针头，每只牛约5ml。 四、胚胎的移植——非手术法移植 （1）受体母牛的准备——以牛为例 将胚胎装入0.25ml的塑料细管内 四、胚胎的移植——非手术法移植 （2）胚胎装管 1.1ml注射器 2.装管接头 3.细管 A.棉塞 B.气泡 Ⅰ、Ⅲ、保护液 Ⅱ.含胚段 装管器械和装管方法 四、胚胎的移植——非手术法移植 胚胎装管