第十五章 高效液相色谱法（课件）- 《分析化学》第二课时同步教学（人卫版第9版）

（一）键合相的种类 1.非极性键合相 ： 非极性烃基，如C18﹑C8﹑C1与苯基等 用于反相色谱； 长链烷基可使溶质的k增大，选择性改善，载样量提高，稳定性更好。 一、化学键合相色谱法的固定相 第二节　HPLC法固定相和流动相及其选择 2.弱极性键合相： 醚基和二羟基等键合相 用于反相或正相色谱 3.极性键合相： 常用氨基﹑氰基键合相 （ ≡Si(CH2)3NH2, ≡Si(CH2)2CN)键合硅胶 一般用于正相色谱 （二）键合相的性质和特点 1.键合反应 硅氧烷（Si－O－Si－C）型： 如：YWG－C18H37，无定形硅胶YWG上键合了十八硅烷基；Spherisorb ODS，球形硅胶Spherisorb 上键合了ODS。 含碳量：含碳的百分数，表示键合反应的量 覆盖度 ：已反应的硅醇基数目占硅胶表面硅醇基总数的比例 封尾：在键合反应后，用三甲基氯硅烷等进行钝化处理，减少残余硅醇基。 2. 键合相的性质 注意： 流动相的pH一般应在2-8（硅胶溶解）。 对试样有适宜的溶解度，k在1~10范围内，最佳范围2~5 ； 与检测器相适应。例如用紫外检测器时，选用截止波长小于检测波长的溶剂。 纯度高，粘度小。（低粘度流动相如甲醇乙腈等可以降低柱压，提高柱效） 对流动相的要求： 二、化学键合相色谱法的流动相 流动相对分离的影响 n由色谱柱（固定相）性能决定； α主要受溶剂种类的影响； k受溶剂配比的影响。 1. 涡流扩散项　A=2λdp 球形、小粒度、均匀固定相，匀浆高压填充，降低A 2. 纵向扩散项　B = 2γDm Dm很小，且U>U最佳，忽略 H = A + Cu 三、 HPLC中的速率理论 3.传质阻抗项 (1)固定相传质阻抗系数CS忽略 ，因df小 (2)流动相传质阻抗系数C=Cm + Csm *动态流动相传质阻抗-在流路中心组分走的快 *静态流动相传质阻抗-部分组分分子在固定相微孔内滞留 C∝ dp2 /Dm Dm∝T/  要求: 固定相dp流动相都小 流动相传质阻抗系数 H=A+Cmu+Csmu HPLC如何提高柱效： ①小粒度、均匀的球形化学键合相； ②低黏度流动相，流速不宜过快； ③柱温适当 HPLC中的速率理论小结： 进样系统 检测器 色谱图 色谱柱 溶剂 高压泵 混合器 高压输送流动相 高效固定相 在线检测 高灵敏检测器 第三节 高效液相色谱仪 组成 输液系统 进样系统 色谱柱系统-色谱柱 检测器 数据记录处理系统-工作站 输液系统 高压输液泵 恒流泵：在输送流动相过程中流量恒定。常用柱塞往复泵 双泵：为了克服流量的脉动。有串联式和并联式 色谱柱 溶剂 柱塞式往复泵工作原理 柱塞向后运动，将贮液瓶中液体吸入缸体； 向前运动，液体输出，流向色谱柱； 前后往复运动，流动相源源不断输送到色谱柱中。 防止固体微粒进入泵体 流动相不应含有腐蚀性物质 防止溶剂瓶内的流动相被用完 不超过规定的最高压力 流动相一般应该先脱气 输液泵操作注意事项： 分离和进样系统 进样器：进样阀（六通阀）、 自动进样装置 紫外检测器 检测原理：朗伯－比尔 定律 特点：灵敏度较高 只能检测有紫外吸收的物质，流动相的截止波长应小于检测波长。 可变波长紫外检测器； 光电二极管阵列检测器（DAD） 荧光检测器（FD) 荧光强度 (F) 与及荧光物质浓度 (C) 之间的关系为： F=KC 灵敏度比紫外检测器高 洗脱技术 梯度洗脱: 在一个分析周期内改变流动相的组成，用来分析组分数目多、性质相差较大样品。 等度洗脱: 在同一分析周期内流动相组成 保持恒定，适合于组分数目较 少、性质差别不大的试样。 优点：能缩短分析时间，提高分离度，改善 峰形，提高检测灵敏度 $$