2024届高三二轮复习生物：专题2：PCR引物的设计课件

模型-4：PCR引物设计原则 模型-4：PCR引物设计原则 两种引物是对向的，目的基因在中间； 两种引物都结合在DNA模板链的_____端，子链延伸时沿着引物向 端延伸； 引物自身不应存在互补序列 两条引物之间不应存在互补序列 引物越长，G+C比例越高，退火温度越高 需在两种引物的5’端加上启动子（或终止子）序列和限制酶的酶识别序列 3’ 3’ 正向引物结构图 与目的基因互补区域 启动子 限制酶 I 反向引物结构图 与目的基因互补区域 终止子 限制酶 II PCR产物结构图 目的基因 启动子 终止子 限制酶 I 限制酶 II 针对训练-1：引物选择 在核酸分子杂交技术中,常常使用已知序列的单链核酸片段作为探针。为了获得B链作探针(如图),可应用PCR技术进行扩增,应选择的引物种类是(　　) A.引物1与引物2 B.引物3与引物4 C.引物2与引物3 D.引物1与引物4 针对训练-2：引物选择 为了对重金属污染的土壤进行生物修复，研究者将从杨树中克隆的重金属转运蛋白（HMA3）基因与外源高效启动子连接，导入杨树基因组中（如图）。 为检测获得的转基因杨树苗中是否含有导入的HMA3基因，同时避免内源HMA3基因的干扰，在进行PCR扩增时，应选择的引物组合是（ ） A. ①+③ B. ①+② C. ③+② D. ③+④ 针对训练-:3：引物选择 如果已知一小段DNA的序列，可采用PCR的方法，简捷地分析出已知序列两侧的序列，具体流程如下图（以EcoR I酶切为例）： （1）步骤I用的EcoR I是一种__________酶，它通过识别特定的__________切割特定位点。 针对训练-:3：引物选择 （2）步骤Ⅱ用的DNA连接酶催化相邻核苷酸之间的3′-羟基与5′-磷酸间形成__________；PCR循环中，升温到95℃是为了获得__________；TaqDNA聚合酶的作用是催化__________。 （3）若下表所列为已知的DNA序列和设计的一些PCR引物，步骤Ⅲ选用的PCR引物必须是__________（从引物①②③④中选择，填编号）。 针对训练-:3：引物选择 针对训练-1 针对训练-1 为生产具有特定性能的α-淀粉酶，研究人员从某种海洋细菌中克隆了α-淀粉酶基因（1656个碱基对），利用基因工程大量制备琢α-淀粉酶，实验流程见下图。请回答下列问题： （1）利用PCR技术扩增α-淀粉酶基因前，需先获得细菌的______________________。 （2）为了便于扩增的DNA片段与表达载体连接，需在引物的______________________端加上限制性酶切位点，且常在两条引物上设计加入不同的限制性酶切位点，主要目的是____________________________________________。 （3）进行扩增时，反应的温度和时间需根据具体情况进行设定，下列选项中______________________的设定与引物有关，______________________的设定与扩增片段的长度有关。（填序号） ①变性温度 ②退火温度 ③延伸温度 ④变性时间 ⑤退火时间 ⑥延伸时间 某小组为研究真菌基因m的功能，构建了融合表达蛋白M和tag标签的质粒，请结合实验流程回答下列问题： （1）目的基因的扩增 ①提取真菌细胞______，经逆转录获得cDNA，进一步获得基因m片段。 ②为了获得融合tag标签的蛋白M，设计引物P2时，不能包含基因m终止密码子的编码序列，否则将导致______。 ③热启动PCR可提高扩增效率，方法之一是：先将除TaqDNA聚合酶（Taq酶）以外的各成分混合后，加热到80℃以上再混入酶，然后直接从94℃开始PCR扩增，下列叙述正确的有____ A．Taq酶最适催化温度范围为50～60℃ B．与常规PCR相比，热启动PCR可减少反应起始时引物错配形成的产物 C．两条子链的合成一定都是从5′端向3′端延伸 D．PCR产物DNA碱基序列的特异性体现了Taq酶的特异性 人类γ基因启动子上游的调控序列中含有 BCL11A 蛋白结合位点，该位点结合 BCL11A 蛋白后，γ基因的表达被抑制。通过改变该结合位点的序列，解除对γ基因表达的抑制，可对某种地中海贫血症进行基因治疗。科研人员扩增了γ基因上游不同长度的片段，将这些片段分别插入表达载体中进行转化和荧光检测，以确定 BCL11A 蛋白结合位点的具体位置。相关信息如图所示。 （1）为将扩增后的产物定向插入载体指导荧光蛋白基因表达，需在引物末端添加限制酶识别序列。据图可知，在 F1～F7末端添加的序列所对应的限制酶是____，在 R 末端添加的序列所对应的限制酶是_____。本实验中，从产物扩增到载体构建完成的整个过程共需要__