第三部分 第十三章 紫外可见分光光度法（课件）- 《分析化学实验》同步教学（华中科技大学版）

第三部分 仪器分析实验 第十三章 紫外-可见分光光度法 1 实验一 工作曲线法测定KMnO4的含量 实验目的 一 2.熟悉 掌握用工作曲线法进行定量测定的方法 熟悉工作曲线的绘制方法，能从吸收光谱曲线中选择最大吸收波长。 掌握紫外-可见分光光度计的操作方法。 1.掌握 实验原理 二 高锰酸钾溶液呈紫红色，在可见光区有吸收，可绘制吸收光谱曲线。通过吸收光谱曲线确定最大吸收波长，在最大吸收波长处进行含量测定。因此可以用可见分光光度法对高锰酸钾溶液进行定性和定量分析。 工作曲线法首先需要配制一系列被测物质的标准溶液，以空白溶液作参比，用最大吸收波长的单色光在最大吸收波长处分别测出它们的吸光度。以浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制出标准曲线或工作曲线。然后，在相同条件下测出试样溶液的吸光度，从标准曲线上找出与之对应的被测组分的含量，或从回归方程中求出被测组分的含量。 工作曲线法 知识拓展 线性回归方程与回归曲线 用数理统计处理两个变量之间的相关关系的数学方法称为回归分析。表示因变量对自变量具有线性 依赖关系的数学表达式叫做线性回归方程。与线性回归方程相对应的直线图形叫做回归曲线。回归分析能使具有相关关系的两个变量依赖关系恢复到最接近原本的函数关系。 实验仪器与试剂 三 1 仪器 紫外-可见分光光度计、分析天平、比色皿、吸量管、容量瓶、 量筒等。 2 试剂 高锰酸钾（AR）、纯化水。 实验内容 四 精密称取高锰酸钾（AR）0.12 g，置1000 mL容量瓶中，加蒸馏水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得高锰酸钾标准溶液。 1、标准溶液的制备 吸收曲线的绘制 标准曲线的绘制 样品的测定 实验数据记录及处理 4 1 2 3 2、比色测定 2、比色测定 精密吸取上述KMnO4标准溶液20 mL于1 cm比色皿中，置于仪器的比色皿架上。在400 nm~700 nm每隔20 nm测量一次被测溶液的吸光度。在有吸收峰或吸收谷的波段，再以5 nm（或更小）的间隔测定一些点。必要时重复一次。记录不同波长处的吸光度值，以波长为横坐标，吸光度为纵坐标，将测得值逐点描绘在坐标纸上并连接起来，即得吸收曲线。从吸收曲线中找出最大吸收波长。 （一）吸收曲线的绘制 2、比色测定 （二）标准曲线的绘制 分别精密量取 KMnO4标准溶液0.00，1.00，2.00，3.00，4.00，5.00 mL于25 mL容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度线，摇匀。以蒸馏水为空白，在最大吸收波长处，依次测定各溶液的吸光度A，然后以浓度c（mg/mL）为横坐标，相应的吸光度A为纵坐标，绘制标准曲线。 2、比色测定 （三）样品的测定 精密量取样品溶液5.00 mL于25 mL容量瓶中（约含KMnO4为0.5 mg），用蒸馏水稀释到刻度，摇匀，依上法操作，测出相应的A值。从标准曲线中查A值所对应的高锰酸钾样品溶液的浓度。 2、比色测定 （四）实验数据记录及处理 分光光度计型号_________ 波长（ λ） 吸光度（A） 2、比色测定 （四）实验数据记录及处理 分光光度计型号_________波长_________ 项目 标准溶液 未知液（mL） 容量瓶编号 1 2 3 4 5 6 7 吸取的体积/mL 0.00 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00 5.00 吸光度A 总含量（mg/ mL） 注意事项 五 注意事项 （1）透光率一致性的核对与校正 将同样厚度的四个比色皿分别编号标记，都装空白溶液，在最大波长处测定各比色皿的透光率，结果应相同。若有显著差异，应将比色皿重新洗涤后再装空白溶液测试，经洗涤可使透光率差异减小时，可通过多次洗涤使透光率一致。若经几次洗涤，各比色皿的透光率差异基本无变化，可用下法校正，以透光率最大的比色皿为100%透光，测定其余各皿的透光率，分别换算成吸光度作为各比色皿的校正值。测定溶液时，以上述100%透光的比色皿作空白，用其他各皿装溶液，测得值以吸光度计算，减去所用比色皿的校正值。 注意事项 （2） 厚度核对 核对比色皿的厚度，需先经过透光一致性的检验。 核对厚度的方法是用同一个吸光溶液吸光度在0.5～0.7间为宜，分别盛于各比色皿中，在同一条件下测定其吸光度。测得值应相同（若有透光校正值应扣除）。若各比色皿测得值间有超出允许误差的差值，则说明厚度有差别，测量值大的厚度大，若不能更换选配，必要时亦可用校正值，即以其中一个为标准，将其测得值与其他比色皿的测得值之比值作为换算成