第十五章 高效液相色谱法（课件）- 《分析化学》定量分析方法同步教学（人卫版第9版）

高效液相色谱定量分析方法 ——内标法 高效液相色谱法定量分析方法 内标法 在待测样品中加入了内标物，以待测物和内标物的峰面积比值进行定量分析。 每次进样都要等体积 外标法 所有组分全部出峰 面积归一化法 色谱条件的变化对结果的影响也非常小，因此，在实际工作中，内标法比较常用。 内标物质 高效液相色谱法定量分析方法 内标法 精密称定供试品的质量，记为m i的含量 精密称定内标物，记为ms 纯品 >98% Ai As ｝ 高效液相色谱法定量分析方法 内标法 高效液相色谱法定量分析方法 内标法 02 两者保留时间接近，但色谱峰能完全分离 03 应为高纯度标准物质，与被测组分的量相当 01 内标物应是样品中不含的组分 内标物必须具备什么样的要求呢？ ？ 高效液相色谱法定量分析方法 内标法 内标法有哪些特点？ 只需待测组分和内标物出峰 即可，不需所有组分出峰。 仪器的稳定性和进样量的变 化对这个方法不影响。 适用于微量组分的测定。 制样要求非常高。 内标物并不是很好寻找。 优点: 01 02 03 02 缺点： 01 ？ 测定生物碱试样中黄连碱和小檗碱的含量 对照液的配制:称取内标物、黄连碱和小檗碱对照品各0.2000g配成混合溶液。测得峰面积分别为3.60cm²、3.43cm²和4.04cm² 。 供试液的配制:称取0.2400g内标物和试样0.8560g同法配制成溶液后，在相同色谱条件下测得峰面积为4.16cm²、3.71cm² 和4.54 cm ² 。 计算试样中黄连碱和小檗碱的含量。 高效液相色谱法定量分析方法 内标法 习题示例 ？ 高效液相色谱法定量分析方法 内标法 ？ 根据题目要求，计算试样中黄连碱和小檗碱的含量。 解：从对照品混合液计算校正因子 从供试品混合液计算试样各成分的含量 注意:这里的A黄代表的是黄连碱的峰面积，在题目中有两个黄连碱的峰面积，一个是对照液黄连碱一个是供试液黄连碱，这里指的是供试液中黄连碱的峰面积。 高效液相色谱法定量分析方法 内标法 根据题目要求，计算试样中黄连碱和小檗碱的含量。 ？ 项目 归一化法 内标法 外标法 称重配样 不需要 需要 不需要 进样量 不需准确 不需准确 需准确 对分组出峰的要求 全部组分 内标物及所测组分 全部过程中条件严格不变 校正因子 需全部组分的校正因子 需全部及所测组分的校正因子 不需要 计算公式 由标准 曲线计算 高效液相色谱定量分析方法 目录 01 面积归一化法 02 外标法 03 内标法 11 高效液相色谱定量分析方法 什么是定量分析方法 实质是搞清楚样品里各组分含量有多少的问题 。 高效液相色谱法：能将组分分离后再分析含量 。 高效液相色谱定量分析方法—案例 怎样测出食品中的添加剂是符合标准的呢？ 高效液相色谱定量分析方法—案例 通过高效液相色谱法，获 得出每一种添加剂的色谱峰。 那究竟怎样测定各组分的含量呢？ 高效液相色谱定量分析方法 定量分析方法 归一化法 外标法 内标法 高效液相色谱定量分析方法—归一化法计算公式 前提 01. 所有组分都能检出色谱峰。 定量依据 02. mi=Aifi 计算公式 03. mi (或Ci)/ m总(或C总) 优点 缺点 简便、准确 定量结果与进样量无关 不适合微量组分的测定 所有组分都出峰 已知组分的f 高效液相色谱定量分析方法—实例 一个仅含药根碱,黄连碱和小檗碱的生物碱样品,用HPLC法测定其含量。测得三个样品的色谱峰面积分别为2.67cm2、3.26 cm2、和3.54cm2 ,准确称取等质量的药根碱、黄连碱和小檗碱对照品与样品同方法配成溶液后,在相同色谱条件下进样,得三个色谱峰面积分别为3.00cm2、2.86 cm2和4.20 cm2 ,计算样品中三组分的质量分数。 归一化法 峰面积 药根碱 黄连碱 小檗碱 样品混合物 2.67 3.62 3.54 标准品混合物 3.00 2.86 4.20 高效液相色谱定量分析方法—实例分析 高效液相色谱定量分析方法—课后练习 分析乙苯及二甲苯三个异构体的样品，用归一化法定量结果如下，计算各组分百分含量。 组分 乙苯 对二甲苯 间二甲苯 邻二甲苯 峰面积A 120 75 140 105 重量校正因子 0.97 1.00 0.96 0.98 （乙苯21.15％；对二甲苯17.50％；间二甲苯31.35％；领二甲苯24.00％） THANK YOU $$