第十五章 高效液相色谱法（课件）- 《分析化学》概述同步教学（人卫版第9版）

高效液相色谱法概念 在技术上采用了高压泵、高效固定相和高灵敏度检测器，实现了分析速度快、分离效率高和操作自动化，这种柱色谱技术被称做高效液相色谱法。 一、高效液相色谱法简介 液相色谱分析是在经典的液体柱色谱基础上，引入了气相色谱的理论； 高效液相色谱法概述 Tswett用希腊语chroma(色)和graphos(谱） 描述他的实验方法，即:Chromatography(色谱法) 20世纪30年代开始广泛研究和应用 (柱色谱,薄层色谱→气相色谱) 高效液相色谱法的广泛应用始于20世纪70年代 （一）.发展历史: 100多年前俄国植物学家Tswett分离植物色素时采用的实验方法: 高效液相色谱法概述 （二）.色谱法概述 色谱法——混合物最有效的分离、分析方法，是一种分离技术。 混合物分离过程：试样中各组分在色谱分离柱中的两相间不断进行着的分配。 一相固定不动，称为固定相。 另一相是携带试样混合物流过固定相的液体，称为流动相。 高效液相色谱法概述 4 1.贮液瓶 2.高压泵 3.进样器 4.分离柱 5.检测器 6.色谱记录仪 （三）.高效液相液相色谱仪 高效液相色谱法概述 二、高效液相色谱法的特点 高压、高效、高速、高灵敏、高选择性。 适用：高沸点、热不稳定样品 （一）特点 以液体作为流动相，液体流经色谱柱时，受到阻力较大必须对流动相施加高压。 一般可达到150～300kg／cm2 一般约可达6000理论塔板／米 流量可达l—10mL／min ①紫外检测器的最小检测量可达(10-9 g)；荧光检测器的灵敏度可达10-11g。 ②所需试样很少；微升数量级 可分离不同类型化合物和异构体，也可分析在性质上极为相似的化合物(同位素、同分异构体、空间异构体、手性化合物） 高效液相色谱法概述 HPLC GC 分析对象的区别 适于溶解后能制成溶液的样品.对分子量大、难气化、热稳定性差，样品均可检测 。占有机物的80% 适于能气化、热稳定性好、沸点低的样品，占有机物的20% 流动相的区别 惰性气体，N2、H2、He 流动相为液体 操作条件差别 加温操作 室温；高压 分析样品区别 破坏样品，不能回收 不破坏样品，能回收 （二）HPLC与GC区别 高效液相色谱法概述 高效液相色谱法是在经典色谱法的基础上， 在技术上，流动相改为高压输送(最高输送 压力可达4.9107Pa);色谱柱是以特殊的方 法用小粒径的填料填充而成，从而使柱效 大大高于经典液相色谱(每米塔板数可达 几万或几十万);同时柱后连有高灵敏度的检测器，可对流出物进行连续检测。 （三）高效液相色谱法与经典液相色谱法 高效液相色谱法概述 三、高效液相色谱法的应用领域 药品与 食品检测 生物工程 生物医药 环保 农业 高效液相色谱法是分析领域中应用最广泛的手段之一 高效液相色谱法概述 高效液相色谱法工作原理 高效液相色谱法工作原理 高效液相色谱法实质上是对样品内各成分先分离再分析的过程！ 高效液相色谱法工作原理 那是怎样进行分离的呢？ 经典柱色谱法分离原理 最后收集各组分进行分析 装有固定相的柱子。固定相在色谱分离中固定不动、对样品产生保留的一相，其可以是吸附剂、化学键合相、 离子交换剂等。 加入样品，样品往往是多成分的混合 物，例如这里是蓝、红、绿三种组分。 加入流动相，流动相是色谱过程中携 带待测组分向前移动的物质 高效液相色谱法工作原理 什么是高效液相色谱法的分离原理呢 如果在色谱柱前面接上高压输液泵，让流动相流动相连续、稳定的注入系统中，色谱柱后面接上检测器将收集到的组分浓度信号转换成电信号，并以色谱图的形式在色谱记录仪中显示出来。 高效液相色谱法 02、高效液相色谱法的分离原理 高效液相色谱法工作原理 高效液相色谱的分离主要与样品在固定相和流动相之间被保留的的程度有关 固定相 流动相 高效液相色谱法工作原理 示例一： 液固吸附色谱实例 四种异构体的分离色谱图 氯化吩噻嗪 异构体具有不同的空间排列方式，因此 吸附剂对它们的吸附能力有所不同，从 而得到了分离。 氯化吩噻嗪四种异构体的分离 吸附剂为硅胶或氧化铝，粒度5-10μm。 固定相 有机溶剂。 流动相 适用于分离分子量200-1000的组分，大多数 用于非离子型化合物的分离，常用于分离同分 异构体。 高效液相色谱法工作原理 液固吸附色谱分离机理 吸附 脱附 再吸附 再脱附 … 分离过程是一个吸附－脱附的平衡过程。 高效液相色谱法工作原理 示例二： 离子色谱法实例 油田水质中的阴离子分析 固定相 流动相 薄壳型阴离子交换树脂 (3×250mm) 0.003mol·L-1 NaHCO3 / 0.0024 mol·L-1 Na2CO3 高效液相色谱法工作原理 Ｃｌ－ ＳＯ４２－ ＣＯ３２－ ＣＯ３２