第十五章 高效液相色谱法（课件）- 《分析化学》第三课时同步教学（人卫版第9版）

Analytical Chemistry 第十五章 高效液相色谱法 分析化学 1.结构流程 超临界流体色谱仪的结构流程 2.主要部件 （1）SFC的高压泵 无脉冲的注射泵；通过电子压力传感器和流量检测器，计算机控制流动相的密度和流量； （2）SFC的色谱柱和固定相 可以采用液相色谱柱和交联毛细管柱； SFC的固定相：固体吸附剂（硅胶）或键合到载体（或毛细管壁）上的高聚物；专用的毛细管柱SFC； （3）流动相 SFC的流动相：超临界流体；CO2、N2O、NH3。CO2应用最广泛；无色、无味、无毒、易得、对各类有机物溶解性好，在紫外光区无吸收；缺点：极性太弱；可加少量甲醇等改性； （4）检测器 可采用液相色谱检测器，也可采用气相色谱的FID检测器 1.聚苯醚低聚物的分析 色谱柱：10m× 63μm i.d. 毛细管柱， 固定相：键合二甲基聚硅氧烷； 流动相：CO2 ；柱温：120 C； 程序升压； 超临界流体色谱的应用 2.甘油三酸酯的分析 四种组分仅双键数目和位置不同，难分离； 色谱柱：DB-225 SFC毛细管柱； 流动相： CO2 ；从15MPa程序升压到27MPa；2.5hr完全分离。 北京制药厂 (1969年) 舒血宁“6911”: 水提物浸膏 (粗提物) 德国 (1975年) 提取纯化的产品:  24%总黄酮、6%萜内酯 炽烧残渣、醇不溶物等 白果酸限量(< 20 ppm < 5 ppm) 指纹图谱(黄酮、内酯) 附录1 银杏叶提取物(EGB) 来源：暨南大学药学院叶文才 8 蒸发光散射检测器（ELSD） 目前，德国企业的银杏叶提取物(EGB)质量标准已作为国际行业标准，并几乎被所有的国家接受及作为其国家标准。 银杏叶提取物(EGB)标准化的过程，不仅是国际天然药物技术标准战略的典型案例，也是GAP 、GMP、指纹图谱技术(1992年已建立)以及活性成分整合治疗作用概念的具体应用。 特 点 技术标准为行业行为，具明显的国际化特征，并可能存在着以下转化进程: 企业技术标准国内行业标准国际行业标准 各会员国的国家标准。 目 的 利用科技进步，不断提高技术门槛。一方面起到规范市场作用，另一方面起到设置贸易壁垒的作用，以争取市场利益的最大化。 目标 DNA 附 录2 分子信标核酸探针的合成与纯化 分子信标是个呈发夹结构、设计十分巧妙的短链DNA分子。由于它特殊的结构，自从1996年被首次合成出来以后，它已经被非常广泛地应用于PCR定量、基因分型、基因芯片、活细胞内mRNA分析以及蛋白质（酶）研究等领域。 11 步骤： 采用固相合成法合成核酸探针； 利用HPLC对粗产物进行纯化； 利用基质辅助激光解析飞行时间质谱仪（MALDI-TOF-MS）对产物进行表征； 对产物进行杂交实验来验证其性能。 采用固相合成法合成核酸探针 POLYGEN DNA合成仪 10-Column DNA Synthesizer 12-Column DNA Synthesizer 96-Column DNA Synthesizer Workstation 384-Column DNA Synthesizer SynTower 利用HPLC对粗产物进行纯化 Equilibration Sample application Elution Regeneration anion exchange chromatography medium :15um beads made of polystyrene/divinyl benzene the ion exchange matrix: (–N+(CH3)3groups 15 Separation of nucleic acids by anion exchange chromatography is mainly based on electrostatic interactions between