第八章 紫外 - 可见分光光度法（课件）- 《分析化学》第三节 紫外 - 可见分光光度计同步教学（人卫版第9版）

紫外分光光度计 Y -X-射线 紫外 可见 红外 微波 无线电 一、基本知识 波长越短，能量越高 电磁辐射的波长与电磁辐射能量之间的关系 National Institutes for Food and Drug Control 近红外 原子外层能级电子 200 400 800 核磁共振 真空紫外 3200 (nm) 波长 National Institutes for Food and Drug Control 二、紫外-可见分光光度计 单光束 双光束 National Institutes for Food and Drug Control 三、紫外-可见分光光度计的检定 紫外-可见分光光度计检定的依据： 三、紫外-可见分光光度计的检定 2. 波长重复性 4. 最小光谱带宽 6. 透射比重复性 8. 电源电压的适应性 10.吸收池的配套性 National Institutes for Food and Drug Control 1. 波长最大允许误差 3. 噪声与漂移 5. 透射比最大允许误差 7. 基线平直度 9. 杂散光 National Institutes for Food and Drug Control 三、紫外-可见分光光度计的检定 紫外-可见分光光度计检定的依据： JJG 178-2007 《中国药典》 参考仪器说明书 1. 波长准确度的检定方法 汞灯中的较强谱线 仪器中氘灯的谱线 钬玻璃 高氯酸钬溶液 仪器波长的允许误差：紫外光区±1 nm 500 nm附近±2 nm 2. 吸光度准确度的检定方法 重铬酸钾的硫酸溶液 在规定的波长处测定并计算吸收系数 3. 杂散光的检查方法 碘化钠溶液 亚硝酸钠溶液 在规定的波长处测定透光率 National Institutes for Food and Drug Control 三、紫外-可见分光光度计的检定 1. 吸收系数测定 ⑴ 性状项下吸收系数的测定 按各品种项下规定的方 法配制供试品溶液，在规定的波长处测定其吸光度，并 计算吸收系数，应符合规定范围。 ⑵ 新品种吸收系数的测定 精密称取精制后的样品适 量，配制成吸光度在0.6-0.8 之间的溶液，置1 cm吸收 池中，在规定波长处测出吸光度；然后再用同批溶剂将 上述溶液稀释1倍，使吸光度在0.3-0.4之间，再按上述 方法测定。 四、测定方法 National Institutes for Food and Drug Control 样品应同时测定2份，同一台仪器测定的2份结果对 平均值的偏差应不超过±0.3%，否则应重新测定。测定 时，先按仪器正常灵敏度测试，然后再减小狭缝测定， 直至减小狭缝吸光值不再增加为止，取吸光度不改变的 数据。再用4台不同型号的仪器复测。最后根据朗伯-比 尔定律求算出吸收系数。 四、测定方法 National Institutes for Food and Drug Control 在测定新品种的吸收系数时，应注意： ① 样品应为精制品，水分或干燥失重应另取样测定并予以 扣除； ② 所用的容量仪器及分析天平应经过检定，如有相差应加 上校正值； ③ 测定所用溶剂的吸光度应符合规定，吸收池应于临用时 配对或作空白校正； ④ 称取样品时，其称量准确度应符合《中国药典》规定； ⑤ 所用分光光度计应经过严格检定， 特别是波长准确度和 吸光度精度要进行校正； ⑥ 要注明测定时的温度。 四、测定方法 National Institutes for Food and Drug Control 2. 鉴别 按各品种项下的规定，测定体供试品溶液 ① 定最大吸收波长、最小吸收波长或有无肩峰； ② 一定浓度的供试品溶液在最大吸收波长处的吸光度； ③ 特定吸收波长下的吸收系数； ④ 特定吸收波长下不同吸收峰处的吸光度比值； ⑤ 经化学反应后产物的吸收光谱特性。 3. 检查（杂质限度） ① 若该物质本身在紫外光区无吸收，而其杂质在紫外光区有 相当强度吸收； ② 杂质的吸收峰处该物质无吸收，则可用本法作杂质检查。 National Institutes for Food and Drug Control 四、测定方法 4. 含景测定 通常选择在物质的最大吸收波长处测出吸光度，然后 用对照品的吸光度或吸收系数计算出被测物质的含量，多 用于制剂的含量测定（溶出度/含量均匀度/含量测定）。 依据：朗伯-比尔（Lambert-Beer）定律 数学表达式： A=lg（1/T）=Ecl 如溶液的浓度(c)为1%（g/ml），光路长度（l）为1cm，相 应的吸光度即为吸收系数，以 表示；