第八章 紫外 - 可见分光光度法（课件）- 《分析化学》紫外-可见分光光度法的定量定性分析同步教学（人卫版第9版）

标准曲线法 1 2 学习内容 xuexineirong 定量分析的理论依据 标准曲线法 2 标准曲线法 在入射光的波长、强度、溶液的温度等不变的情况下，溶液的吸光度与溶液的浓度及液层厚度的乘积成正比，即： 一、定量分析的理论依据 ● 理论依据：朗伯-比尔定律 A = K•c• L 3 A = K•c 如果测定时进一步保持溶液的厚度L不变，则待测溶液的吸光度A与浓度C呈正比例关系，即： 吸光度 A 浓度c A-c 关系曲线 K为吸光系数（是常数） 标准曲线法 4 二、定量分析方法 （一）单组分定量分析的条件 单组分进行定量分析 多组分进行定量分析 单组分样品的定量分析 UV法 标准曲线法 ► 只测定试样中的一种成分。 ► 测量波长下，试样中其他组分对被测组分不干扰。 5 系列标 准溶液 标准溶液 的浓度 C0(空白) 0 1 C1 2 C2 3 C3 4 C4 5 C5 编号 标准曲线法 （二）单组分样品定量分析的方法---- 标准曲线法 (1)以待测组分的纯品配制系列浓度的标准溶液（包括不含被测组分的空白试液）。 6 标准溶液 的浓度 标准溶液 吸光度 C0(空白) A0 (空白) C1 A1 C2 A2 C3 A3 C4 A4 C5 A5 （2）以不含被测组分的空白试液为参比，测定各标准溶液的吸光度。 标准曲线法 7 吸光度 A5 A4 A3 A2 A1 A 0 c0 c1 c2 c3 c4 c5 浓度 · · · · · · 标准溶液的A--C关系曲线 回归方程: A=kc+b （3）绘制吸光度-浓度关系曲线，拟合回归方程。 标准曲线法 8 （4）在相同条件下测定试样溶液的吸光度Ax，将测得的吸光度Ax代入到回归方程，即可求出待测组分的浓度。 吸光度 A5 A4 A3 A2 A1 A 0 c0 c1 c2 c3 c4 c5 浓度 · · · · · · 标准溶液的A--C关系曲线 回归方程: A=kc+b 标准曲线法 9 编号 1 2 3 4 5 6 7 浓度c（mg/25ml） 0.000 0.200 0.400 0.600 0.800 1.000 Cx 吸光度（A） 0.000 0.240 0.491 0.712 0.950 1.156 0.845 【应用示例】维生素B12 的含量测定 取标准溶液和样品溶液盛于1cm吸收池中，在361nm波长处测定吸光度，结果见下表： 标准曲线法 精密取0.200mg/ml的VB12标准液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml，分别置于25ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，得到1-6号系列标准溶液。 另取维生素B12 供试品3.0mg置于25ml量瓶中，同法稀释至刻度得到7号待测样品液。 10 ②进行线性拟合，得到回归方程： A=0.0105+1.162C（r=0.9996） 维生素B12的A-c工作曲线 ①以测得的标准溶液的吸光度与浓度绘制A-C工作曲线（见下图）。 C = 0.718mg/25ml ④计算维生素B12的百分含量： ③将测得的样品溶液的吸光度值代入回归方程，计算样品溶液维生素B12 的浓度： 标准曲线法 解： 11 紫外-可见分光光度法的定性分析 学习内容 Learning content 定性分析的理论依据 1 定性鉴别分析方法 2 纯度检查方法 3 定性的理论依据 不同的物质其吸收光谱及其特征值不同。 吸收光谱的特征值包括： 吸收光谱形状，吸收峰（谷）的数目，各吸收峰（谷）所在的波长、强度和对应的吸光系数等。 紫外—可见分光光度法的定性分析方法 一、定性分析的理论依据 吸 光 度 波长λ/nm A B 不同物质的吸收光谱图 紫外—可见分光光度法的定性分析方法 如图，物质A与物质B的吸收光谱及特征值不同，就属于不同的物质。 紫外—可见分光光度法的定性分析方法 通过比较吸收光谱形状及其特征值可以进行： 杂质检查 定性鉴别 结构分析 0.6 0.4 0.2 0.0 300 400 500 600 波长λ/nm 定性分析的应用范围： 紫外—可见分光光度法的定性分析方法 将待测试样与标准品配成浓度相同或相近的溶液。 在相同条件下分别测定试样与标准品的吸收光谱。 然后比对两吸收曲线是否一致