内容正文:
第2章 细胞工程
第1节 植物细胞工程
一.植物细胞工程的基本技术
1.细胞工程的概念
(1)原理和方法:应用细胞生物学、分子生物学和发育生物学等多学科的原理和方法。
(2)操作水平:细胞器水平、细胞水平或组织水平。
(3)目的:获得特定的细胞、组织、器官、个体或其产品。
(4)分类:①植物细胞工程:植物组织培养技术、植物体细胞杂交技术。
②动物细胞工程:动物细胞培养、动物细胞融合、动物细胞核移植等技术。
2.植物细胞的全能性
(1)概念:细胞经分裂和分化后,仍然具有产生完整生物体或分化成其他各种细胞的潜能。(黑体字)
(2)原因:生物体的每个细胞中都含有发育成完整个体所需的全套基因。
(3)在生物的生长发育过程中,并不是所有的细胞都能表现出全能性。
实例:芽原基的细胞只能发育为芽,叶原基的细胞只能发育为叶。
原因:在特定的时间和空间条件下,细胞中的基因会选择性地表达。
(4)大小比较
①受精卵>生殖细胞>体细胞②分化程度低的细胞>分化程度高的细胞③植物细胞>动物细胞
(5)植物细胞表现出全能性的条件:离体、营养物质、激素、适宜的温度和PH。
(6)体现:利用植物的一片花瓣,一粒花粉,甚至一个细胞都可以繁殖出新的植株。
注意:植物的种子发育成完整植株,不能体现细胞的全能性,因为种子中的胚已完成了早期发育,相当于新植物体的幼体,没有体现出细胞具有发育成完整植株或分化成其他各种细胞的潜能。
3.植物组织培养技术
(1)概念
指将离体的植物器官、组织或细胞等培养在人工配制的培养基上,给予适宜的培养条件,诱导其形成完整植株的技术。(黑体字)
(2)原理:植物细胞具有全能性
(3)过程:
接种外植体→诱导愈伤组织→诱导生芽→诱导生根→移栽成活
再分化
脱分化
(4)外植体:用于植物组织培养的,离体的植物器官组织或细胞。
愈伤组织:不定形的薄壁组织团块。
脱分化:让已经分化的细胞,经过诱导后,失去其特有的结构和功能,转变成未分化细胞的过程。
脱分化实质:基因的选择性表达
再分化:愈伤组织重新分化成芽、根等器官的过程。
(5)探究实践——菊花的组织培养(了解)
取材、
消毒
①用流水充分冲洗外植体(幼嫩的茎段);酒精擦拭双手和超净工作台;②外植体的消毒:用酒精消毒30 s,然后立即用无菌水清洗2~3次;再用次氯酸钠溶液处理30 min后,立即用无菌水清洗2~3次;③用解剖刀将外植体切成0.5~1 cm长的小段
接种
将外植体的1/3~1/2插入诱导愈伤组织的培养基中,诱导脱分化,长出愈伤组织
转接
①将生长良好的愈伤组织转接到诱导生芽的培养基上;②长出芽后再转接到诱导生根的培养基上,进一步诱导形成试管苗
移栽
将试管苗移植到消过毒的蛭石或珍珠岩等环境中,待其长壮后再移栽入土
注:植物激素中,生长素和细胞分裂素是启动细胞分裂脱分化和再分化的关键激素,它们的浓度、比例等都会影响植物细胞的发育方向。
生长素/细
胞分裂素
植物细胞的发育方向
高
有利于根的分化、抑制芽的形成
低
有利于芽的分化、抑制根的形成
适中
促进愈伤组织的生长
简记为:“高”根,“低”芽,“中”愈伤(生根裂芽等愈伤)
①
②诱导细胞脱分化形成愈伤组织期间一般不需要光照,在后续的培养过程中,每日需要给予适当时间和强度的光照,有利于叶片内叶绿素的合成。
③植物组织培养中所需的碳源一般为蔗糖,少数为葡萄糖和果糖,原因是蔗糖既可提供充足的碳源,又可维持相对适中的渗透压,而葡萄糖和果糖在与蔗糖提供相同数量碳源的前提下,其造成的渗透压可能过高。
④菊花的组织培养过程中更换培养基的原因:诱导愈伤组织形成和诱导愈伤组织分化成芽、根所需的生长素和细胞分裂素的比例不同。
⑤在植物组织培养过程中,培养基中常常要添加植物激素,但不是都必须添加。如菊花茎段组织培养比较容易,且外植体一般含有少量的内源激素,故培养基中不需要添加植物激素。
⑥制备菊花的外植体时,首先要消毒,其次要选取幼嫩的茎段,因为该部分细胞易于诱导形成愈伤组织。
⑦接种时注意外植体的方向,不要倒插。
4.植物体细胞杂交技术
(1)概念:将不同来源的植物体细胞,在一定条件下融合成杂种细胞,并把杂种细胞培育成新植物体的技术。(黑体字)
(2)原理:植物体细胞融合利用了细胞膜的流动性,杂种细胞培育成杂种植株利用了植物细胞的全能性。
(3)基本过程
①两两融合后的细胞不一定(一定/不一定)是杂种细胞
②诱导融合后的培养瓶中的细胞有哪几类? 融合的细胞类型有三种AA、BB和AB,在培养瓶中还有A、B等未融合的细胞,故融合后的细胞需要筛选。
③上述细胞融合过程的完成与线粒体和高尔基体(填细胞器)密切相关
④若一植物细胞A含有2x条染色体,2个染色体组,基因型为Aabb,另一植物