2024届高三生物二轮复习讲义关于DNA的粗提取和鉴定

【关于DNA的粗提取和鉴定】 1.DNA粗提取与鉴定的原理？ ①DNA不溶于酒精，某些蛋白质溶于酒精 ②DNA在不同浓度的NaCl溶液中的溶解度不同，溶于2mol/L的NaCl溶液 ③鉴定原理：DNA遇二苯胺试剂呈现蓝色 2. ①不能选择哺乳动物成熟的红细胞的原因？ ①哺乳动物成熟的红细胞中没有细胞核和线粒体，几乎不含DNA ②可选用菜花做实验材料的原因？ ②是因为菜花细胞无色，容易观察颜色变化。 ③取表层花的部分进行研磨的原因？ ③取表层花的部分进行研磨是因为这个部位细胞处于迅速分裂状态，DNA含量高。 3.如何破碎细胞： 如果是鸡血：在鸡血细胞液中加入一定量的蒸馏水，同时用玻璃棒搅拌，过滤后收集滤液即可。 如果实验材料是植物细胞，加入一定的洗涤剂和食盐，进行充分的搅拌和研磨，过滤后收集研磨液。 （注意：洗涤剂能够瓦解细胞膜，但对DNA没有影响。） 4.研磨后过滤的方案是？ ①4℃冰箱静置后取上清液 ②直接将研磨液倒入塑料离心管中，离心后取上清液 5.4℃冰箱放置几分钟的作用？ 抑制核酸水解酶的活性，进而抑制DNA降解 6.搅拌时应轻缓、并沿一个方向的原因？ 减少DNA断裂，以便获得较完整的DNA分子 7.提取和分离DNA用塑料离心管的原因是？ 细胞破碎后释放出的DNA，容易被玻璃容器吸附；用塑料烧杯和试管，可以减少DNA的损失 8. 粗提取到的DNA中可能含有哪些杂质？ 核蛋白、多糖等杂质 9. 观察提取到的DNA的颜色，如果不是白色丝状物，可能的原因？ DNA中杂质较多 10.如何去除滤液中的杂质 方案1--溶解法：利用DNA在不同浓度NaCl溶液中溶解度不同。通过调节NaCl溶液的浓度出去溶于和不溶于NaCl溶液的杂质。 方案2--酶解法：利用DNA对酶的耐受性。直接在滤液中加入嫩肉粉，反应10-15min，嫩肉粉中的木瓜蛋白酶能够分解蛋白质，而不会破坏DNA。 方案3--加热变性法：利用DNA对高温的耐受性。大多数蛋白质不能忍受60—80℃的高温，而DNA在80℃以上才会变性。注意严格控制温度范围，使蛋白质变性沉淀而DNA分子还未变性，这样可将DNA与蛋白质分离。 【深入思考】 ①为什么反复地溶解与析出DNA，能够去除杂质？ 用高盐浓度的溶液溶解DNA，能除去在高盐中不能溶解的杂质；用低盐浓度使DNA析出，能除去溶解在低盐溶液中的杂质。因此，通过反复溶解与析出DNA，就能够除去与DNA溶解度不同的多种杂质。 ②方案二与方案三的原理有什么不同？ 方案二是利用蛋白酶分解杂质蛋白，从而使提取的DNA与蛋白质分开；方案三利用的是DNA和蛋白质对高温耐受性的不同，从而使蛋白质变性，与DNA分离。 方法拓展： 若想提高提取的DNA的纯度，可以在研磨、过滤后得到的滤液中加入等体积的氯仿，离心后取上清液，再加入等体积、预冷的体积分数为95%的酒精以析出DNA。这样操作的原因是氯仿能使蛋白质失去水合状态而变性，从而析出；离心后，溶液会分层，上层为水相，下层为有机相（氯仿）；DNA溶解在上层，析出的蛋白质的密度比水的大，比氯仿的小，蛋白质分布在水相与有机相中间，这样就实现了蛋白质与DNA的分离。 11.如果用二苯胺试剂鉴定不呈现蓝色，说明了什么？ DNA的含量低或者是操作失误 10. ①DNA与二苯胺产生颜色反应的机理（了解）；②什么时候观察颜色反应？ ①DNA中的嘌呤核苷酸中的脱氧核糖遇酸生成ω-羟基-γ-酮基戊醛，在沸水浴条件下，它和二苯胺试剂反应使溶液呈蓝色，因此，二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。 ②试管冷却后观察颜色反应 12.二苯胺的使用原则及注意事项？ 沸水浴加热、现配现用（棕色瓶保存） 注意：加入二苯胺试剂后沸水浴处理的时间要在5min以上且要等到冷却后再观察结果，这样才可以观察到较为明显的显色反应。 【深入思考】 ①对照组和实验组如何设计？预期实验结果如何？ ②A试管在实验中的作用是_________________________。 B试管中溶液颜色的变化程度主要与________________________________有关。 ③在沸水浴中加热的目的是______________________，同时说明DNA对高温有较强的____________。 答案： ① ②对照、加入试管中的DNA(丝状物)的多少 ③加快颜色反应速度、耐受性 13.研磨不充分对实验结果的影响?(了解) 如果研磨不充分，细胞核内的DNA释放不完全，提取的DNA量偏少，会导致看不到絮状沉淀物或沉淀物量少、用鉴定试剂鉴定不显示蓝色等。 11. 移液动作轻柔的原因： 提取过程中，加入冷的无水乙醇后，需倾斜试管，吸头接触试管内壁，让溶液贴着管壁缓慢流下，切忌快速加入冲散已析出的DNA絮状物。旋转试管动作快速轻柔，并始终沿